FLAG tag Peptide (Synonyms: H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH) |
| Catalog No.GP10150 |
FLAG tag Peptide es un péptido de 8 aminoácidos (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys) que contiene un sitio de restricción de la quinasa intestinal.
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Cas No.: 98849-88-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
FLAG tag Peptide es un péptido de 8 aminoácidos (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys) que contiene un sitio de restricción de la quinasa intestinal. El sistema de fusión de péptidos FLAG tag se utiliza en cromatografía de inmunoafinidad para la identificación y purificación de proteínas. Los péptidos etiquetados con FLAG tag permiten la elución bajo condiciones no desnaturalizantes[1,6]. El FLAG tag Peptide puede fusionarse tanto al extremo N-terminal como al C-terminal de una proteína de fusión dada.
El sistema de fusión de péptidos FLAG tag Peptide constituye una técnica única y ampliamente útil para la identificación y purificación de proteínas. Cuando se une covalentemente a un soporte sólido, el anticuerpo anti-Flag M1 puede usarse para la purificación rápida de proteínas de fusión FLAG tag Peptide en un procedimiento de cromatografía de afinidad dependiente de calcio, suave. Las proteínas de fusión FLAG tag Peptide suelen purificarse hasta la homogeneidad en un solo paso, comenzando desde un homogeneizado o sobrenadante de células crudas, sin exponer nunca la proteína a condiciones distintas de la solución salina fisiológica a pH 7,2 (con calcio o EDTA). Todo el proceso de purificación puede llevarse a cabo en varias horas[2-3].
La proteína de fusión FLAG tag Peptide N-terminal puede purificarse mediante gel de afinidad de agarosa[5]. Un procedimiento abreviado de purificación de proteínas, donde se combinan la desintegración mecánica de células y la purificación por afinidad mediante la inmovilización del anticuerpo anti-Flag M1 en cuentas de vidrio magnéticas. Las cuentas de vidrio modificadas se añadieron a las células de levadura y se mezclaron en un mezclador de vórtice de laboratorio. Las cuentas de vidrio magnéticas capturan la proteína objetivo, mientras las células de levadura se disgregan. Al hacer contacto con un imán estacionario, las cuentas de vidrio magnéticas pueden separarse eficientemente de los restos celulares de levadura. Agentes quelantes, como el EDTA, fueron capaces de eluir las proteínas de fusión FLAG tag Peptide de las cuentas de vidrio magnéticas[4].
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
| Purificación de complejos ribonucleoproteicos (RNP) compuestos por ARN celular específico mediante el uso de oligonucleótidos antisentido (ASO) acoplados a péptidos FLAG [1]: | |
Método de preparación | Preparación del oligonucleótido antisentido conjugado con péptido FLAG: 1. Mezcle 50 μL de oligonucleótido a 20 μM (1,000 pmol/50 μL) frío en hielo con 50 μL de NaIO4 frío recién preparado a 1 M. 2. Incube en hielo durante 10 minutos. 3. Añada 1 mL de LiClO4/acetona al 2% frío y mezcle vigorosamente. 4. Incube en hielo durante 10 minutos. 5. Centrifugue el tubo a 20,000 g a 4 ℃ durante 10 minutos. 6. Aspire cuidadosamente el sobrenadante para desecharlo y añada 1 mL de acetona fría. 7. Centrifugue el tubo a 20,000 g a 4℃ durante 5 minutos. 8. Mientras se centrifuga, prepare la solución de FLAG-hidrazida. 9. Aspire el sobrenadante para desecharlo. 10. Disuelva el oligonucleótido precipitado en 12 μL de acetato de sodio 0.1 M (pH 5.2). 11. Añada 12 μL de la solución de péptido-FLAG-hidrazida a 30 mM. 12. Incube el tubo a temperatura ambiente durante 30 minutos. 13. Añada 10 μL de NaCNBH3 a 1 M. 14. Incube el tubo a temperatura ambiente durante 30 minutos. 15. Añada 60 μL de agua ultrapura y 10 μL de acetato de sodio 3 M (pH 5.2), luego mezcle vigorosamente. 16. Añada 250 μL de etanol al 100 % y mezcle vigorosamente. 17. Incube el tubo a -80℃ durante 30 minutos. 18. Centrifugue el tubo a 15,000 g durante 10 minutos. 19. Aspire cuidadosamente el sobrenadante para desecharlo y añada 1 mL de etanol al 80 %. 20. Centrifugue el tubo a 15,000 g durante 5 minutos. 21. Aspire cuidadosamente el sobrenadante para desecharlo. Repita el paso de lavado. 22. Disuelva el pellet de oligonucleótido en 50 μL de agua. 23. Estime la concentración del oligonucleótido conjugado con péptido-FLAG midiendo la absorbancia a 260 nm y comparando con la absorbancia de la solución original de oligonucleótido. |
Referencias: [1]. Adachi S, Natsume T. Purificación de ARN no codificante y proteínas asociadas utilizando oligonucleótidos antisentido conjugados con péptidos FLAG. Methods Mol Biol. 2015;1262:265-74. doi: 10.1007/978-1-4939-2253-6_16. PMID: 25555587. | |
| Cas No. | 98849-88-8 | SDF | |
| Sinónimos | H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH | ||
| Chemical Name | FLAG Peptide | ||
| Canonical SMILES | C1=CC(=CC=C1CC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O)NC(=O)C(CC(=O)O)N)O | ||
| Formula | C41H60N10O20 | M.Wt | 1012.97 |
| Solubility | ≥50.6 mg/mL in DMSO, ≥210.6 mg/mL in Water, ≥34.03 mg/mL in EtOH | Storage | Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.9872 mL | 4.936 mL | 9.872 mL |
| 5 mM | 0.1974 mL | 0.9872 mL | 1.9744 mL |
| 10 mM | 0.0987 mL | 0.4936 mL | 0.9872 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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