FLAG tag Peptide

FLAG tag Peptide es un péptido de 8 aminoácidos (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys) que contiene un sitio de restricción de la quinasa intestinal. El sistema de fusión de péptidos FLAG tag se utiliza en cromatografía de inmunoafinidad para la identificación y purificación de proteínas. Los péptidos etiquetados con FLAG tag permiten la elución bajo condiciones no desnaturalizantes^[1,6]. El FLAG tag Peptide puede fusionarse tanto al extremo N-terminal como al C-terminal de una proteína de fusión dada.

El sistema de fusión de péptidos FLAG tag Peptide constituye una técnica única y ampliamente útil para la identificación y purificación de proteínas. Cuando se une covalentemente a un soporte sólido, el anticuerpo anti-Flag M1 puede usarse para la purificación rápida de proteínas de fusión FLAG tag Peptide en un procedimiento de cromatografía de afinidad dependiente de calcio, suave. Las proteínas de fusión FLAG tag Peptide suelen purificarse hasta la homogeneidad en un solo paso, comenzando desde un homogeneizado o sobrenadante de células crudas, sin exponer nunca la proteína a condiciones distintas de la solución salina fisiológica a pH 7,2 (con calcio o EDTA). Todo el proceso de purificación puede llevarse a cabo en varias horas^[2-3].

La proteína de fusión FLAG tag Peptide N-terminal puede purificarse mediante gel de afinidad de agarosa^[5]. Un procedimiento abreviado de purificación de proteínas, donde se combinan la desintegración mecánica de células y la purificación por afinidad mediante la inmovilización del anticuerpo anti-Flag M1 en cuentas de vidrio magnéticas. Las cuentas de vidrio modificadas se añadieron a las células de levadura y se mezclaron en un mezclador de vórtice de laboratorio. Las cuentas de vidrio magnéticas capturan la proteína objetivo, mientras las células de levadura se disgregan. Al hacer contacto con un imán estacionario, las cuentas de vidrio magnéticas pueden separarse eficientemente de los restos celulares de levadura. Agentes quelantes, como el EDTA, fueron capaces de eluir las proteínas de fusión FLAG tag Peptide de las cuentas de vidrio magnéticas^[4].

References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.