La tinción de ácido mucleico Hoechst 33342 (Ex/Em: 350/461 nm) se usa mucho como un contratinte nuclear que puede entrar en las células. Cuando se une al ADN de cadena doble dsDNA, emite una fluorescencia azul. Hoechst 33342 se emplea comúnmente en varios estudios relacionados con el recuento de células, análisis del ciclo de la célula y la replicación celular. Es particularmente útil para identificar núcleos condensados en células apoptóticas con la tinción BrdU para estudios del ciclo de la célula.

Los tintes Hoechst también ayudan a controlar la viabilidad de las células mediante la acechanza de los cambios en los espectros de emisión celular. Como tinciones menores de ADN de unión a surco con selectividad AT, los tintes Hoechst son capaces de unirse a todos los ácidos nucleicos, pero muestran una mayor aumento de la fluorescencia para las cadenas de DNA de doble cadena ricas en AT en comparación con las hebras ricas en GC ^[1]. Esta propiedad se ha explotado para identificar las bandas Q en los cromosomas, que son regiones ricas en pares de bases AT que fluorescen intensamente cuando se tiñen con el tinte quinacrino ^[2].

Hoechst 33342 trihydrochloride

Fig. Fluorescence excitation and emission spectra of Hoechst 33342 bound to DNA

References:
[1]. Portugal J, Waring MJ. Assignment of DNA binding sites for 4′, 6-diamidine-2-phenylindole and bisbenzimide (Hoechst 33258). A comparative footprinting study. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Gene Structure and Expression. 1988 Feb 28;949(2):158-68.
[2]. Weisblum B, Haenssler E. Fluorometric properties of the bibenzimidazole derivative Hoechst 33258, a fluorescent probe specific for AT concentration in chromosomal DNA. Chromosoma. 1974 Sep;46(3):255-60.

Protocolo (Protocol)

Eate plan solo es una guía, por favor modifíquela para satisfacer sus necesidades específicas.

1.Preparar la solución de tinción Hoechst 33342

(1) Prepaar la solución de caldo de tinte Hoechst 33342 : Use DMSO para hacer disolver el sólido Hoechst 33342 y prepare una solución de caldo de tinte Hoechst 33342 de 10 mg/mL.

Nota: Se recomienda dividir la solución madre del Hoechst en porciones pequeñas y guardarla a oscuras a -4°C o -20°C, para evitar la congelación y descongelación repetidas.

(2) Preparación la solución de trabajo: Usa medio sin suero precalentado (como HBSS o PBS) para diluir la solución original y preparar una solución de trabajo Hoechst 33342 con una concentración de 10 μg/mL.

Nota: Ajusta la concentración de fluido de trabajo Hoechst de acuerdo con la situación real y prepárelo inmediatamente.

2.Tinción celular

2.1 Células de suspensión (tomando la placa de 6 pozos como ejemplo)
(1) Centrifuga las células suspendidas a 1000g durante 3-5 minutos. Deseche el sobrenadante y lávelo dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.

(3) Agregue 1 mL de solución de trabajo de tinte Hoechst 33342 e incube a temperatura ambiente en la oscuridad durante 5-10 minutos.
(3) Después de la incubación, centrifugar a 1000g durante 5 minutos, eliminar el sobrenadante, agregar PBS y lavar 2-3 veces, 5 minutos cada vez.
(4) Utilice un medio de cultivo celular sin suero o PBS para resuspender a través de microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
2.2 Células adherentes

(1) Cultive células adherentes en cubiertas estériles.

(2) Retire la cubierta del medio de cultivo, sucte el exceso de medio de cultivo y coloque el cubrecubierta en un ambiente húmedo.

(3) Agregue 100uL de solución de trabajo de tinte Hoechst 33342 desde una esquina de la hoja de cubierta, agite suavemente para recubrir todas las células con el tinte, e incube a temperatura ambiente en la oscuridad durante 5-15 minutos.
(4) Aspire la solución de trabajo de tinte, lave la cubierta de 2 a 3 veces con solución de cultivo y observe con un microscopio de fluorescencia.

3. Detección por microscopio: La luz excitación/emisión de Hoechst 33342 es de 350/461nm respectivamente.

Precauciones:
① Para la tinción de células fijas o muestras de tejido, el fijador debe eliminarse enjuagando después de la fijación;
② La tinción de Hoechst 33342 generalmente se realiza después de otra tinción. Si no se requiere otra tinción, la tinción Hoechst 33342 se realiza directamente;
③ Para ralentizar el enfriamiento por fluorescencia, se recomienda usar un agente de montaje de enfriamiento antifluorecencia;
④ Los tintes fluorscentes tienen problemas de extinción, así que trate de evitar la luz;
⑤ Hoechst 33342 es irritante para el cuerpo humano. Por su seguridad y salud, use una bata de laboratorio y guantes desechables cuando opere.

Documentos del producto (Product Documents)

Batch:Purity:>98.00%Appearance:A solid

COA SDS Data Sheet

Datos biológicos (Biological Data)

1 / 2

Propiedades químicas (Chemical Properties)

N.º CAS

23491-52-3

Fórmula molecular

C₂₇H₂₈N₆O

Peso molecular

452.55

Solubilidad

DMSO : 10 mg/mL (22.10 mM; Need ultrasonic)|Water : 1 mg/mL (2.21 mM; ultrasonic and warming and heat to 80°C)

Almacenamiento

4°C, protect from light

Consejos generales

Seleccione un disolvente adecuado según los datos de solubilidad del producto. Una vez preparada, divida la solución madre en alícuotas para evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Utilice las soluciones madre en un plazo de 6 meses si se conservan a -80°C, o de 1 mes si se conservan a -20°C.
Para mejorar la solubilidad, caliente el tubo a 37°C y soníquelo durante un periodo adecuado.

Condiciones de envío

Las muestras de evaluación se envían con acumuladores de frío. Los demás tamaños se envían a temperatura ambiente o, previa solicitud, con acumuladores de frío.

Calculadoras (Calculators)Molaridad / Dilución / Peso molecular / Conversión de unidades / Formulación in vivo / Solubilidad

Masa

Volumen

Concentración

Peso molecular

g/mol

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