Polyethylenimine linear (MW:10000)

Este plan solo proporciona una guía,modifíquelo para satisfacer sus necesidades específicas.

1.Preparación d ela solución

(1) Prepare la solución de almacenamiento: Equilibre el sólido criopreservado a la temperatura ambiente,use agua estéril para disolver,Polyethylenimine linear y prepare una solución de almancenamiento con una concentración de 1 mg/ml.

Nota:La solución de almacenamiento no utilizada debe ser alícuota y almacenada en la oscuridad a -20°C o -80°C para evitar la congelación y descongelación repetidas.

(2) Preparar la solución de trabajo:Antes del experimento formal,diluir la solución de almacenamiento con agua estéril (o medio sin suero) hasta la concentración de trabajo requerida,por ejemplo: 250 μg/mL.

Nota:Ajuste la concentración de trabajo óptima de acuerdo con la situación real o consulte la literatura para establecer la concentración de gradiente usted mismo para explorar.El fluido de trabajo debe prepararse y usarse inmediatamente.

2. Pasos para la transfección transitoria de las células 293T usando Polyethylenimine linear ^[1] (de la literatura,solo como referencia)

(1) Siembra celular: Un día antes de la transfección,se sembraron las células 293T en la fase de crecimiento exponencial en una placa de cultivo de 6 cm de diámetro.Asegúrese de que el crecimiento celular alcance una confluencia del 50-70%.

(2)Cambinar el medio de cultivo:Retire el medio de cultivo celular y reemplácelo con medio de cultivo sin suero.

(3) Preparar DNA-PEI complejo: Preparar 240 μL de la solución de ADN (32 μg/mL). Agregue 180µL de la solución estéril de PEL (250 µg/mL).Agite ligeramente para mezclar e incube a la temperatura ambiente durante 30 minutos.

(4) Agregue DNA-PEI complejo:Agregue el complejo gota a gota a las células e incube en una incubadora de 5% CO₂ durante 6 horas.

(5) Reemplace el medio de cultivo:Después de 6 horas,reemplace el medio de cultivo que contiene el complejo ADN-PEI con medio de cultivo DMEM suplementado con suero fetal bovino(FBS).

(6) Cultivo y espresión génica:Continúe cultivando en una incubadora de CO₂ durante 48 horas y luego analice la expresión génica.

Nota:Este protocolo experimental solo proporciona una referencia para usar Polyethylenimine linear en expeimentos de transfección celular.Modifique los pasos específicos de acuerdo con las necesidades expeimentales.Realice los experimentos de control los necesarios,incluidas las células no tratadas y las células que utilizan los reactivos de transfección eficaces conocidos,para evaluar la eficiencia de la transfección y la citotoxicidad.

References:
[1] Wang W , Zheng Q , Yu C ,et al.WSV056 Inhibits Shrimp Nitric Oxide Synthase Activity by Downregulating[J].Frontiers in microbiology, 2021, 12:796049.