Rebaudioside A

Líneas celulares

Método de preparación

Las células IPEC-J2 se cultivaron en el medio modificado de Eagle/medio F-12 de jamón (DMEM/F-12) suplementado con 100 unidades/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina y 10 % de suero bovino fetal inactivado por calor (FBS). Las células se cultivaron a 37 °C, 5% de CO2 y 95% de humedad relativa, y el medio se cambió tres veces por semana. Las células se cultivaron en matraces de cultivo simples de 25 o 75 cm2 y se pasaron antes de la confluencia (aproximadamente cada 3-4 días). Las células IPEC-J2 se cultivaron en las cámaras transwell y se trataron con el medio que contenía Rebaudiosido A (0,5, 2,5, 5,0 μM). Las células se incubaron durante 24 horas, se lavaron con PBS y se añadieron 800 µl de Tri-Reactivo para extraer ARN. El ADNc se sintetizó utilizando un kit de síntesis de ADNc, y se realizó PCR en tiempo real en las siguientes condiciones: 50 °C durante 2 minutos, 95 °C durante 10 minutos, seguido de 40 ciclos de 15 segundos a 95 °C y 1 minuto a 60 °C. La expresión relativa de ARNm se estandarizó en función de la expresión de ARNm de β-actina y se informó como la expresión relativa de ARNm en comparación con el control. La viabilidad celular se determinó utilizando el método MTT. Las células se lavaron con PBS, luego se añadieron 0,5 mg/ml de MTT al medio de cultivo. Después de 2,5 horas de incubación, se utilizó PBS para lavar las células, y se añadieron 300 µl de DMSO para disolver los cristales azules de metileno formados. Después de la incubación a temperatura ambiente durante 15 minutos, se transfirieron 100 µl a una placa de microtiter transparente de 96 pozos, y la absorbancia se midió a 590 nm.

Condiciones de reacción

Áreas de aplicación

Modelos animales

Método de preparación

Coloque 100-120 g de ratas Wistar macho de 1 mes de edad en jaulas de policarbonato en condiciones controladas (21±1°C, 50%-60% de humedad relativa y un ciclo oscuro/claro de 12 horas). Aliméntalos con comida para ratas y proporcióneles agua libremente. Divida las ratas en cuatro grupos (n = 8). Generar fibrosis hepática mediante inyección intraperitoneal de tioacetamida (TAA) tres veces por semana (200 mg/kg; i.p.) durante 8 semanas. Durante el tratamiento con TAA, inyecte Rebaudioside A dos veces al día (20 mg/kg; i.p.). El primer grupo (n = 8) consistió en animales de control que solo recibieron el portador (salina, i.p.); el segundo grupo (n = 8) recibió TAA; el tercer grupo (n = 8) recibió TAA disuelto en solución salina intraperitoneal diariamente; el cuarto grupo (n = 8) solo recibió Rebaudiosido A dos veces al día (20 mg/kg; i.p.). Bajo anestesia leve con ketamina/salazopirina, sangre a los animales a través de una punción cardíaca y obtenga rápidamente las muestras de hígado y sangre. Tome secciones de hígado del lóbulo derecho de cada rata y guárdelas a -70 °C para más ensayos inmunohistoquímicos.

Forma de dosificación

Áreas de aplicación

References:
[1] Thøgersen R, Petrat-Melin B, Zamaratskaia G, et al. In vitro effects of rebaudioside A, stevioside and steviol on porcine cytochrome p450 expression and activity[J]. Food Chemistry, 2018, 258: 245-253.
[2] Casas?Grajales S, Reyes?Gordillo K, Cerda?García?Rojas C M, et al. Rebaudioside A administration prevents experimental liver fibrosis: An in vivo and in vitro study of the mechanisms of action involved[J]. Journal of Applied Toxicology, 2019, 39(8): 1118-1131.