Taurochenodeoxycholic Acid (sodium salt)

Líneas celulares

Método de preparación

Ensayo de actividad de la fosfatasa alcalina (ALP)

Las células se sembraron a una densidad de 5 × 10³ de células por pozo en una placa de 96 pocillos y se trataron con diferentes concentraciones de Taurochenodeoxycholic Acid (sodium salt) (0, 10, 100, 250 y 500μM). Después de 7 días, la placa de 96 pozos se lavó dos veces con solución salina tamponada con fosfato. Las células se resuspendieron en Triton X-100 al 0,1 % y se incubaron a 4 °C durante 1 hora. La absorbancia del lisado celular se midió a 405 nm en una reacción con fosfato de p-nitrofenilo, y la actividad de ALP se calculó utilizando una fórmula estándar. La cuantificación de proteínas de los lisados celulares se realizó utilizando un kit de ensayo de TCA. La cantidad de fosfato de p-nitrofenilo se normalizó a la cantidad total de proteína y se registró como proteína nM/μg.

Medición de la acumulación de calcio

La acumulación de calcio se analizó utilizando la tinción con sulfato rojo de alizarina (AR-S). Las células se sembraron a una densidad de 5×10³ células por pozo en una placa de 96 pozos y se cultivaron continuamente en ácido taurochenodeoxicólico (sal de sodio) durante 20 días. Luego, las células se fijaron con etanol al 70% (v/v) durante 1 hora a 4 °C y se tiñeron con una solución AR-S de 40 mM. Las células se observaron bajo un microscopio con un aumento de 2,5× y se solubilizaron utilizando cloruro de cetilpiridinio al 10% (p/v) en fosfato de sodio 10 mM (pH 7,0). La absorbancia se midió a 562 nm utilizando un lector de microplacas.

Condiciones de reacción

Áreas de aplicación

Modelos animales

Método de preparación

Las ratas fueron asignadas aleatoriamente a una dieta de sal normal (0,8% de NaCl) o a una dieta alta en sal (8% de NaCl) durante 3 semanas. El grupo de ratas que recibieron la dieta alta en sal se dividió además en dos subgrupos, que recibieron inyecciones intraperitoneales diarias de Taurochenodeoxycholic Acid (sodium salt) (TUDCA, 400 mg/kg/día) o vehículo (salina isotónica) durante todo el período de 3 semanas. En el último día del estudio (después de un día de aclimatación a jaulas metabólicas), se recogió orina, se obtuvo una muestra de plasma, se sacrificaron los animales y se cosecharon los riñones. En algunos casos, los riñones se dividieron en corteza renal y médula externa, se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80℃ hasta un análisis posterior. Otros riñones se fijaron durante la noche en formalina y se incorporaron en parafina para estudios inmunohistoquímicos. Dado que los estudios preliminares no revelaron cambios en la médula externa, el presente estudio se centró principalmente en la corteza renal. En un segundo conjunto de animales, se implantaron transmisores de PA-C40 en la aorta abdominal para controlar la presión arterial en el estado consciente, como se describió anteriormente. En resumen, las ratas fueron anestesiadas con isoflurano del 2 al 3 %, se expuso la aorta abdominal y el transmisor se implantó y se aseguró con pegamento tisular. Los animales se recuperaron de la cirugía durante una semana antes del inicio del protocolo de 3 semanas, durante el cual la presión arterial media (MAP) se registró a intervalos de 10 segundos cada 10 minutos.

Forma de dosificación

Áreas de aplicación

References:
[1] Kang H, Yang S, Lee J. Taurochenodeoxycholic Acid Enhances Osteogenic Differentiation through EGFR/p-Akt/CREB1 Pathway in Mesenchymal Stem Cells. Cells. 2023 May 24;12(11):1463.
[2] De Miguel C, Sedaka R, Kasztan M, et al. Taurochenodeoxycholic Acid (TUDCA) abolishes chronic high salt-induced renal injury and inflammation. Acta Physiol (Oxf). 2019 May;226(1):e13227.