المراجع (Citations)
2 publicationsمنشورات الباحثين الذين استخدموا هذا المنتجالوصف (Description)
FLAG tag Peptide هو بيبتيد-8(Asp-Tyr-lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys) يحتوى على موقع تقييد كيناز معوي.
يتم استخدام نظام اندماج FLAG Tag peptide في كروماتوغرافيا الألفة المناعية لتحديد وتنقية البروتين. بيبتيد علامة FLAG tag Peptide يسمح بعملية الاستخلاص تحت ظروف غير مشوهة. يمك دمج استخدام FLAG tag Peptide إلى محطة نهائية-C أو -N من بروتين الانصهار.
نظام اندماج البيبتيد لعلامة FLAG tag Peptide يشتمل على تقنية فريدة ومفيدة على نطاق واسع لتحديد وتنقية البروتين. عندما يتم ربطه إتساهميا بدعامة صلبة، يمكن استخدام الجسم المضاد لFlag M1 للتنقية السريعة من بروتينات دمج FLAG tag Peptide في إجراء كروماتوغرافيا التقارب الخفيف الذي يعتمد على كالسيوم. تمت تنقية بروتينات دمج FLAG tag Peptide بشكل رئيسي لتجانس في خطوة واحدة، حيث يبدء من متجانس الخلايا الخام أو السائل العلوي، بدون تعريض البروتين لظروف أخرى غير المحلول الملحي الفسيولوجي عند pH 7.2(مع كالسيوم أو EDTA). يمكن تنفيذ عملية التنقية بأكملها في بعض ساعات.
يمكن تنقية بروتين دمج FLAG tag Peptide عند طرف-N بجل تقارب الاغاروز. إجراء تنقية لبروتين، حيث يتم الجمع بين تفتت الخلية الميكانيكية وتنقية التقارب من خلال تثبيت الجسم المضاد لFlag M1 على خرزات زجاجية مغناطيسية. تمت إضافة خرزات زجاجية معدلة إلى خلايا الخميرة وتم تخليطها على خلاط دوامي في المختبر. تلتقط خرزات زجاجية مغناطيسية البروتين المستهدف، بينما يتم تدخل خلايا خميرة. عن طريق الاتصال بمغناطيس ثابت، يمكن توزيع الخرزات الزجاجية المغناطيسية بشكل فعال من حطام خلية خميرة. عوامل الاستخلاب، مثل EDTA، كانت قادرة على إخراج بروتينات دمج FLAG tag Peptide من خرزات زجاجية مغناطيسية.
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
البروتوكول (Protocol)
[1]التنقية من مركبات ribonucleoprotein (RNP) التي تتكون من rna خلوي محدد عن طريق سحب FLAG peptide coupled antisense oligonucleotide (ASO): | |
طريقة التحضير | التحصير من FLAG tag Peptide-Conjugated Antisense Oligonucleotide 1\ قم بتخليط 50 μL من 20 μM (1,000 pmol/50 μL) أوليجونوكليوتيد بارد مثلج مع 50 μL من 1 M من NaIO4 بارد طازج. 2\ قم بتفريخها في الجليد لمدة 10 دقائق. 3\ قم بإضافة 1 mL من 2 % LiClO4/acetone بارد مثلج وقم بدوامتها 4\ قم بتفريخها في الجليد لمدة 10 دقائق. 5\ قم بطرد الأنبوب عند 20,000 g عند 4 ℃ لمدة 10 دقائق. 6\ قم باستنشاق السائل العلوي بعناية للتخلص منه وإضافة 1 mL من أسيتون بارد. 7\ قم بطرد الأنبوب عند 20,000 g عند 4 ℃ لمدة 10 دقائق. 8\ عند الطرد المركزي، يرجى تحضير محلول هيدرازيد-FLAG 9\ قم باستنشاق السائل العلوي بعناية للتخلص منه 10\ قم بإذابة الأوليجونوكليوتيد المتسرب في 12 μL من 0.1 M خلات الصوديوم(pH 5.2). 11\ قم بإضافة 12 μL من 30 mM محلول هيدرازيد-FLAG-peptide. 12\ قم بتفريخ الأنبوب عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 13\ قم بإضافة 10 μL من 1 M من NaCNBH3. 14\ قم بتفريخ الأنبوب عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 15\ قم بإضافة 60 μL من ماء فائق النقاء و10 μL من 3 M خلات الصوديوم(pH 5.2)، ثم قم بدوامتها. 16\ قم بإضافة 250 μL من 100 % إيثانول ثم قم بدوامتها. 17\ قم بتفريخ الأنبوب عند -80℃ لمدة 30 دقيقة. 18\ قم بطرد الأنبوب عند 15,000 g لمدة 10 دقائق. 19\ قم باستنشاق السائل العلوي بعناية للتخلص منه وإضافة 1 mL من 80 % إيثانول 20\ قم بطرد الأنبوب عند 15,000 g لمدة 5 دقائق. 21\ قم باستنشاق السائل العلوي بعناية للتخلص منه. قم بإعادة خطوة الغسل. 22\ قم بإذابة حبيبة قليل النيوكليوتيد في 50 μL من الماء. 23\ قم بتقدير التركيز لـFLAG-peptide-conjugated-oligonucleotide عن طريق قياس الامتصاص عند 260 nm ومقارنته مع الامتصاص لمحلول قليل النيوكليوتيد الأصلي. |
ظروف التفاعل | \ |
التطبيقات | \ |
References: | |
وثائق المنتج (Product Documents)
الخصائص الكيميائية (Chemical Properties)
استخدم المحاليل المخزونة خلال 6 أشهر عند حفظها في -80°C، أو خلال شهر واحد عند حفظها في -20°C.
لتحسين الذوبانية، سخّن الأنبوب إلى 37°C وعرّضه للموجات فوق الصوتية لمدة مناسبة.
الحاسبات (Calculators)المولارية / التخفيف / الوزن الجزيئي / تحويل الوحدات / تركيبة داخل الجسم الحي / الذوبانية
Reviews
Review for FLAG tag Peptide
- 5 Star100%
- 4 Star0%
- 3 Star0%
- 2 Star0%
- 1 Star0%
