2×Taq PCR Master Mix(with blue dye) |
| Catalog No.GK10034 |
2×Taq PCR Master Mix (with blue dye) est une solution de prémélange PCR prête à l'emploi, rapide et simple, qui contient un tampon de chargement bleu.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2×Taq PCR Master Mix (with blue dye) est une solution de prémélange PCR prête à l'emploi, rapide et simple, qui contient un tampon de chargement bleu. Cette formulation prémélangée permet d’économiser du temps et de réduire la contamination grâce à un nombre réduit d’étapes de pipetage requises pour la mise en place de la PCR.
Le mélange réactionnel ne nécessite que l'ajout d'amorces, de matrice et de ddH2O. 2×Taq PCR Master Mix contient déjà un tampon de chargement bleu, ce qui évite l'étape du mélange du tampon de chargement et peut indiquer la progression de l'électrophorèse après la réaction PCR. La vitesse de migration du colorant bleu dans le gel à 1% de TAE agarose est semblable à celle d’un fragment d’ADN double brin de 500 bp.
L'ADN polymérase Taq n'a pas d'activité exonucléasique 3'→5' et génère des produits PCR avec des surplombs 3'-dA, qui peuvent être directement utilisés pour le clonage de vecteurs TA après purification. Il est recommandé d'utiliser 2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) (référence catalogue : GK10036) lorsque la teneur en GC du fragment cible est élevée (>60%) ou que le fragment cible est trop long.
2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) peut être utilisé pour la détection de gènes à grande échelle, des expériences de PCR semi-quantitatives, et la détection de quantités traces d’adn après amplification de PCR, ainsi que pour l’amplification de produits de PCR à partir de modèles complexes tels que des génome, par exemple, pour le clonage de gènes exprimés, l’analyse de mutations ponctuelles de gènes (SNP), et des mutations ciblées de gènes.
Ce protocole ne constitue qu'une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoin spécifiques.
Note: dosage du modèle: 10-1000 ng adn génomique; 1 à 30 ng de plasmide ou 1 à 2 μl d’ADNc après réaction RT-PCR. L'exemple ci-dessus est un système de réaction PCR conventionnel, qui n'est donné qu'à titre de référence. Les conditions de réaction réelles varient en fonction des différentes structures telles que les modèles et les amorces. Les meilleures conditions de réaction devraient être fixées en fonction des caractéristiques des gabarits, des amorces et des fragments cibles, et le système de réaction devrait être élargi ou réduit en fonction de la proportion.
Questions fréquemment posées (FAQ) :
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Problème courant |
Causes possibles |
Solutions |
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Produit PCR faible ou inexistant. |
Conception inappropriée des amorces. |
Choisir le logiciel de conception d'amorces approprié pour la conception d'amorces. |
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Pour obtenir une teneur élevée en GC ou des fragments longs. |
Utiliser une ADN polymérase plus appropriée telle que 2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) (Catalogue : GK10036). |
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La température de recuit n'est pas appropriée ; La période de prolongation est courte ; Le nombre de cycles est insuffisant. |
Optimisation des conditions expérimentales de la PCR. |
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Faibles concentrations de gabarit ; l'échantillon expérimental est endommagé ou dégradé. |
Augmenter le volume du modèle de manière appropriée. Préparer à nouveau les modèles. |
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La qualité du modèle est médiocre. |
Purifier l'ADN matrice par des méthodes appropriées de purification de l'ADN (par exemple, purification sur colonne). |
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Concentration d'amorce et concentration de Mg2+ inappropriées. |
Ajuster la concentration de l'amorce et la concentration de Mg2+ de façon appropriée. |
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Amplification de produits non spécifiques dans les réactions en chaîne de la polymérase quantitative (qPCR) |
Les amorces ont montré une liaison non spécifique et une dimérisation. |
Réduire la concentration de l'amorce et revoir la conception de l'amorce si nécessaire. |
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La qualité du modèle est médiocre ; les modèles sont contaminés ou dégradés. |
Vérifier l’intégrité et la concentration du gabarit par électrophorèse sur Gel et repurifier le gabarit si nécessaire. |
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Conditions de cyclage inappropriées. |
S'il y a des bandes parasites plus petites que la bande cible, il est possible de l'ajuster en augmentant la température de recuit et en diminuant le nombre de cycles ; s'il y a des bandes parasites plus grandes que la bande cible, il faut raccourcir le temps d'élongation et diminuer le nombre de cycles. |
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Les produits d'amplification apparaissent dans le contrôle vierge |
Conception inappropriée des amorces. |
Les séquences amplifiées sont homologues aux séquences amplifiées non ciblées, et PCR peut également amplifier les séquences qui ne sont pas des séquences cibles, en redessinant des amorces si nécessaire. |
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Le système de réaction PCR a été contaminé. |
Si la taille de la bande du produit d’amplification n’est pas conforme à la bande cible, elle indique une contamination; Répétez l’expérience en remplaçant Mix, l’eau ou l’apprêt par un nouveau; Préparer le système de réaction dans un banc ultra-propre pour réduire la pollution par les aérosols. |
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Pas de bande ou bande faible |
Dégradation des amorces. |
Vérifier que les amorces ne se sont pas dégradées en raison de mauvaises conditions de stockage et les remplacer si nécessaire. |
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Mauvaise qualité du modèle. |
La qualité du gabarit doit être confirmée avant la réaction PCR. Un entreposage inadéquat à long terme et la congélation et la décongélation répétées peuvent causer la rupture du gabarit, l’ouverture d’une boucle ou la dégradation, et préparer le gabarit d’ADN fraîchement préparé; Si les gabarits ne sont plus utilisables, les produits de la première amplification peuvent être dilués en multiplicité pour être utilisés comme gabarits pour la seconde amplification. |
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Concentration enzymatique. |
Il est recommandé d'augmenter la quantité d'enzymes. |
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Conditions de cyclage inappropriées. |
Effectuer le programme Touch Down ; optimiser la durée d'extension et régler plus de cycles. |
| GK10034-1 ml | GK10034-5 ml | GK10034-10 ml | GK10034-100 ml | |
| 2×Taq PCR Master Mix(with blue dye) | 1 ml | 5×1 ml | 10×1 ml | 100×1 ml |
| Nuclease-free ddH2O | 1 ml | 5 ml | 2×5 ml | 20×5 ml |
| Applications |
1.Tests génétiques: l’erreur entre les différents lots de ce produit est très faible, et il convient aux tests génétiques à grande échelle, aux expériences de PCR semi-quantitatives et à la détection d’ADN à trace.
2.Utilisé pour amplifier les produits de PCR à partir de modèles complexes tels que des génomes, tels que le clonage de gènes exprimés, la mutagénèse dirigée sur le site de gènes, et l’analyse de mutations ponctuelles de gènes intracellulaires (SNP). |
| Shipping | Ship with blue ice. |
| Storage Conditions | Pour le stockage à long terme, entreposer SVP à -20˚C, valide pendant 24 mois. Pour une utilisation fréquente, entreposer à 4˚C pendant au moins six mois. |
| Usage | For research use only! Not for use on humans. |
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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