2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye) |
| Catalog No.GK10035 |
2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye) est une solution prémélangée prête à l'emploi, rapide et simple pour la PCR qui contient un tampon de chargement bleu et qui convient aux réactions PCR super rapides.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye) est une solution prémélangée prête à l'emploi, rapide et simple pour la PCR qui contient un tampon de chargement bleu et qui convient aux réactions PCR super rapides.
Le mélange réactionnel n’a besoin que d’ajouter des amorces, du gabarit et du ddH2O. 2×Taq PCR Master Mix contient déjà un tampon de chargement bleu, qui a sauvé l’étape du tampon de chargement du mélange, et pourrait indiquer la progression de l’électrophorèse après la réaction PCR. La vitesse de migration du colorant bleu dans le gel à 1% de TAE agarose est semblable à celle d’un fragment d’adn double brin de 500 bp.
2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye) est bien adapté pour les réactions de PCR Super rapide, atteignant une vitesse d’extension de 5-10 sec/kb, permettant la réalisation de PCR la plus courte en aussi peu qu’une demi-heure. Il s’attaque efficacement à des modèles complexes à contenu GC élevé (>60%) et à des structures secondaires, tout en prenant en charge la détection génique à grande échelle. Pour les fragments courts ou les modèles simples, tels que les modèles plasmidiques, l'utilisation d'une vitesse d'extension de 5 sec/kb peut contribuer à réduire les cycles et à raccourcir davantage la durée de la PCR. Pour les fragments longs ( ≥ 3 kb ) ou les modèles complexes produisant de faibles rendements, une vitesse d'extension de 15-20 sec/kb ou une augmentation des cycles peut s'avérer nécessaire.
Ce produit convient aux tests génétiques à grande échelle, aux expériences de PCR semi-quantitatives et à la détection d’ADN à l’état de trace; Il facilite également l’amplification rapide par PCR pour le clonage de gènes exprimés, l’analyse de mutations ponctuelles de gènes intracellulaires (SNP), et d’autres fins.
Recommandations d’application:
Ce produit a une capacité très forte d’amplification, et l’amplification parfois non spécifique peut se produire. Les méthodes suivantes peuvent être utilisées pour réduire les bandes d’amplification non spécifiques.
(1) Augmenter la température de recuit de 2 à 3 degrés ;
(2) Réduire le volume du mélange, par exemple en remplaçant 10 μl par 8 μl ;
(3) Réduire le nombre de cycles de 2 pour réduire les bandes d'amplification non spécifiques.
Ce protocole ne constitue qu'une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.
Note: dosage du modèle: 10-1000 ng adn génomique; 1 à 30 ng de plasmide ou 1 à 2μl d’ADNc après réaction RT-PCR. L’exemple ci-dessus est un système de réaction PCR conventionnel, qui est à titre indicatif seulement. Les conditions de réaction réelles varient selon les structures telles que les gabarits et les amorces. Les meilleures conditions de réaction devraient être fixées en fonction des caractéristiques des gabarits, des amorces et des fragments cibles, et le système de réaction devrait être élargi ou réduit en fonction de la proportion.
Foire aux questions (FAQ) :
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Problème courant |
Causes possibles |
Solutions |
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Produit PCR faible ou inexistant. |
Conception inappropriée des amorces. |
Choisir le logiciel de conception d'amorces approprié pour la conception d'amorces. |
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Pour obtenir une teneur élevée en GC ou des fragments longs. |
Utiliser une ADN polymérase plus appropriée telle que le mélange 2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) (Catalogue : GK10036). |
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La température de recuit n’est pas appropriée; La période de prolongation est courte; Le nombre de cycles est insuffisant. |
Optimisation des conditions expérimentales de PCR. |
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Faibles concentrations de gabarits; L’échantillon expérimental est endommagé ou dégradé. |
Augmentez le volume du modèle de manière appropriée. Repréparer les modèles. |
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La qualité du modèle est médiocre. |
Purifier l'ADN matrice par des méthodes appropriées de purification de l'ADN (par exemple, purification sur colonne). |
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Concentration d’amorce inappropriée et concentration de Mg2+. |
Ajuster la concentration de l’apprêt et la concentration de Mg2+ de façon appropriée. |
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Amplification de produits non spécifiques dans les réactions en chaîne de la polymérase quantitative (qPCR) |
Les amorces ont montré une liaison non spécifique et une dimérisation. |
Réduire la concentration de l'amorce et revoir la conception de l'amorce si nécessaire. |
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La qualité du modèle est médiocre ; les modèles sont contaminés ou dégradés. |
Vérifier l'intégrité et la concentration du modèle par électrophorèse sur gel et repurifier le modèle si nécessaire. |
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Conditions de cyclage inappropriées. |
S’il y a des bandes parasites plus petites que la bande cible, il peut être ajusté en augmentant la température de recuit et en abaissant le nombre de cycles; S’il y a des bandes parasites plus grandes que la bande cible, raccourcir le temps d’allongement et abaisser le nombre de cycles. |
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Les produits d'amplification apparaissent dans le contrôle vierge |
Conception inappropriée des amorces. |
Les séquences amplifiées sont homologues aux séquences amplifiées non ciblées, et PCR peut également amplifier les séquences qui ne sont pas des séquences cibles, redessinant les amorces si nécessaire. |
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Le système de réaction PCR a été contaminé. |
Si la taille de la bande du produit d’amplification n’est pas conforme à la bande cible, elle indique une contamination; Répétez l’expérience en remplaçant Mix, l’eau ou l’apprêt par un nouveau; Préparer le système de réaction dans un banc ultra-propre pour réduire la pollution par les aérosols. |
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Pas de bande ou bande faible |
Dégradation des amorces. |
Vérifier la dégradation des amorces en raison de mauvaises conditions de stockage et remplacer les amorces si nécessaire. |
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Mauvaise qualité du modèle. |
La qualité du modèle doit être confirmée avant la réaction PCR. Un mauvais stockage à long terme et des congélations et décongélations répétées peuvent entraîner une rupture, une ouverture de boucle ou une dégradation du gabarit, et préparer un gabarit d'ADN frais ; si les gabarits ne sont plus utilisables, les produits de la première amplification peuvent être dilués en multiplicité pour être utilisés comme gabarits pour la deuxième amplification. |
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Concentration enzymatique. |
Il est recommandé d'augmenter la quantité d'enzymes. |
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Conditions de cyclage inappropriées. |
Effectuer le programme Touch Down ; optimiser la durée d'extension et régler plus de cycles. |
| Applications |
1.Tests génétiques : L'erreur entre les différents lots de ce produit est très faible, et il est particulièrement adapté aux tests génétiques à grande échelle, aux expériences de PCR semi-quantitative et à la détection de traces d'ADN.
2.Amplification PCR ultra-rapide: comme le clonage de gènes exprimés, l’analyse de mutations intracellulaires de gènes ponctuels (SNP), etc. 3. Le produit PCR a un surplomb de 3’ d’extrémité dA, qui peut être utilisé pour le clonage ultérieur TA. |
| Shipping | Ship with blue ice. |
| Storage Conditions | Pour le stockage à long terme, entreposer SVP à -20˚C, valide pendant 24 mois. Pour une utilisation fréquente, entreposer à 4˚C pendant au moins six mois. |
| Usage | For research use only! Not for use on humans. |
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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