2×Taq PCR Fusion-Fast Mix(with blue dye) |
| Catalog No.GK10036 |
2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) est une solution prémélangée PCR ultra-rapide et haute-fidélité qui contient un tampon de chargement bleu.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) est une solution prémélangée PCR ultra-rapide et haute-fidélité qui contient un tampon de chargement bleu. Cette formulation pré-mélangée permet de gagner du temps et de réduire la contamination grâce à un nombre réduit d'étapes de pipetage nécessaires à la préparation de la PCR.
Le mélange réactionnel n’a besoin que d’ajouter des amorces, du gabarit et du ddH2O. 2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) contient déjà un tampon de chargement bleu, ce qui a sauvé l’étape du tampon de chargement du mélange, et pourrait indiquer la progression de l’électrophorèse après la réaction de PCR. La vitesse de migration du colorant bleu dans le gel à 1% de TAE agarose est similaire à celle d’un fragment d’adn double brin de 500 bp.
L'ADN polymérase Fusion-Fast n'a pas d'activité exonucléasique 3'→5' et génère des produits PCR avec des surplombs 3'-dA, qui peuvent être directement utilisés pour le clonage de vecteurs TA après purification. L'ADN polymérase Fusion-Fast peut s'attaquer à des modèles complexes à forte teneur en GC ( > 60 % ) et à des structures secondaires, tout en permettant la détection de gènes à grande échelle. Le taux d’erreur de l’ADN polymérase rapide à la fusion est 50 fois inférieur à celui de l’ADN polymérase Taq et 6 fois inférieur à celui de la polymérase Taq Super rapide. Il est caractérisé par la haute fidélité, le bas taux de décalage, la vitesse rapide d’amplification (5-10 sec/kb), la capacité d’amplifier de longs fragments (>3kb), la spécificité forte, et l’adaptabilité large.
2×Taq PCR Fusion-Fast Mix (with blue dye) peut être utilisé pour la détection de gènes à grande échelle, les expériences de PCR semi-quantitatives et la détection de traces d'ADN après l'amplification par PCR, ainsi que pour l'amplification de produits PCR à partir de modèles complexes tels que les génomes, par exemple pour le clonage de gènes exprimés, l'analyse de mutations ponctuelles de gènes (SNP) et les mutations ciblées de gènes.
Ce programme ne fournit qu'un seul guide, veuillez le modifier en fonction de vos besoins spécifiques.
Note :
1. Dosage du modèle : 10-1000 ng d'ADN génomique ; 1 à 30 ng de plasmide ou 1 à 2 μl d'ADNc après la réaction de RT-PCR. L'exemple ci-dessus est un système de réaction PCR conventionnel, qui n'est donné qu'à titre de référence. Les conditions de réaction réelles varient en fonction des différentes structures telles que les modèles et les amorces. Les meilleures conditions de réaction doivent être définies en fonction des caractéristiques des modèles, des amorces et des fragments cibles, et le système de réaction doit être agrandi ou réduit en fonction de la proportion.
2. Vitesse d’amplification: pour les gabarits de GC élevé ou de AT élevé et les gabarits d’extraction de brut, une réduction appropriée de la vitesse d’allongement peut améliorer le taux de réussite de PCR. Pour les trois cas ci-dessus, 10-15 sec/kb est recommandé.
Foire aux questions (FAQ):
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Problème courant |
Causes possibles |
Solutions |
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Produit PCR faible ou inexistant. |
Conception inappropriée des amorces. |
Choisissez le logiciel de conception d’apprêt approprié pour la conception d’apprêt. |
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La température de recuit n'est pas appropriée ; La période de prolongation est courte ; Le nombre de cycles est insuffisant. |
Optimisation des conditions expérimentales de PCR. |
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Faibles concentrations de gabarit ; l'échantillon expérimental est endommagé ou dégradé. |
Augmenter le volume du modèle de manière appropriée. Préparer à nouveau les modèles. |
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La qualité du modèle est médiocre. |
Purifier l'ADN matrice par des méthodes appropriées de purification de l'ADN (par exemple, purification sur colonne). |
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Concentration d'amorce et concentration de Mg2+ inappropriées. |
Ajuster la concentration de l'amorce et la concentration de Mg2+ de façon appropriée. |
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Amplification de produits non spécifiques dans les réactions en chaîne de la polymérase quantitative (qPCR) |
Les amorces ont montré une liaison non spécifique et une dimérisation. |
Réduire la concentration de l'amorce et revoir la conception de l'amorce si nécessaire. |
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La qualité du modèle est médiocre ; les modèles sont contaminés ou dégradés. |
Vérifier l'intégrité et la concentration du gabarit par électrophorèse sur gel et repurifier le gabarit si nécessaire. |
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Conditions de cyclage inappropriées.. |
S'il y a des bandes parasites plus petites que la bande cible, il est possible de l'ajuster en augmentant la température de recuit et en diminuant le nombre de cycles ; s'il y a des bandes parasites plus grandes que la bande cible, il faut raccourcir le temps d'élongation et diminuer le nombre de cycles. |
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Les produits d'amplification apparaissent dans le contrôle vierge |
Conception inappropriée des amorces. |
Les séquences amplifiées sont homologues aux séquences amplifiées non ciblées, et PCR peut également amplifier des séquences qui ne sont pas des séquences cibles, en redéfinissant les amorces si nécessaire. |
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Le système de réaction PCR a été contaminé. |
Si la taille de la bande du produit d'amplification ne correspond pas à la bande cible, cela indique une contamination ; recommencer l'expérience en remplaçant Mix, l'eau ou l'amorce par un nouveau ; préparer le système de réaction sur un banc ultra-propre afin de réduire la pollution par les aérosols. |
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Pas de bande ou bande faible |
Dégradation des amorces. |
Vérifier que les amorces ne se sont pas dégradées en raison de mauvaises conditions de stockage et les remplacer si nécessaire. |
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Mauvaise qualité du modèle. |
La qualité du modèle doit être confirmée avant la réaction PCR. Un mauvais stockage à long terme et des congélations et décongélations répétées peuvent entraîner une rupture, une ouverture de boucle ou une dégradation du gabarit, et préparer un gabarit d'ADN frais ; si les gabarits ne sont plus utilisables, les produits de la première amplification peuvent être dilués en multiplicité pour être utilisés comme gabarits pour la deuxième amplification. |
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Concentration enzymatique. |
Il est recommandé d'augmenter la quantité d'enzymes. |
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Conditions cyclables inappropriées. |
Effectuer le programme Touch Down; Optimisez le temps d’extension et définissez plus de cycles. |
| Applications |
1.Tests génétiques : L'erreur entre les différents lots de ce produit est très faible et il convient aux tests génétiques à grande échelle, aux expériences de PCR semi-quantitative et à la détection de traces d'ADN.
2.Utilisé pour amplifier des produits PCR à partir de modèles complexes tels que des génomes, comme le clonage de gènes exprimés, la mutagenèse dirigée de gènes et l'analyse de mutations ponctuelles de gènes intracellulaires (SNP). |
| Shipping | Ship with blue ice. |
| Storage Conditions | Pour le stockage à long terme, entreposer SVP à -20˚C, valide pendant 24 mois. Pour une utilisation fréquente, entreposer à 4˚C pendant au moins six mois. |
| Usage | For research use only! Not for use on humans. |
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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