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BMPO est un piège à spin performant, perméable aux cellules qui peut saisir le radical hydroxyle (OH) et l'anion superoxyde (O2•−), pour former les adduits stables BMPO-OOH[1]. Grâce à BMPO, on peut détecter la transformation de BMPO-OOH en BMPO-OH en présence de glutathion (GSH)[2]. BMPO est couramment utilisé à mettre en évidence le superoxyde produit par la synthase d'oxyde nitrique (NOS) au sein des neurones[3].
Protocole (Protocol)
Evaluation des radicaux hydroxyles à l'aide de BMPO
Ce protocole constitue uniquement une ligne directrice; il doit être adapté selon vos besoins spécifiques.
1.Préparation des solutions stock, travail
(1)Préparer la solution stock de BMPO (100mM) en dissolvant la poudre de BMPO dans DMSO. Répartir ensuite la solution en aliquotes de volumes adaptés, conserver à -20°C.
(2)Diluer la soluton stock de BMPO avec du tampon phosphate pour obtenir une solution de travail à 30mM finale.
Remarque : La solution de travail doit être préparée extemporanément le jour de l'expérience.
2.Etude des adduits de BMPO par résonance paramagnétique électronique (RPE)
(1)BMPO-OOH est préparé par ajout de la solution saturée de KO2/DMSO (10% v/v DMSO/tampon final) à BMPO (concentration finale de 30mM; 37°C) dilué dans le tampon phosphate.
(2)L'échantillon BMPO/KO2 est mélangé pendant 10s, puis les composés étudiés, mélanges H2Sn, SeOn2− ou H2Sn/SeOn2−, sont ajoutés. L'échantillon est à nouveau mélangé pendant 5s, transféré dans une cellule plate aqueuse standard pour RPE en cavité. Le premier spectre RPE est enregistré 100S après l'ajout des composés. Les séries de spectres RPE individuels des adduits à spin BMPO sont acquises sous forme de 15 balayages séquentiels, toutes les 42s, pour un temps total d'acquisition de 11min. Chaque expérience est répétée au moins deux fois.
3.Précautions expérimentales
(1)Ce protocole et tous les réactifs sont destinés exclusivement à la recherche scientifique.
(2)Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables lors de l'opération.
Documents produit (Product Documents)
Propriétés chimiques (Chemical Properties)
Utilisez les solutions mères dans les 6 mois si elles sont conservées à -80°C, ou dans le mois si elles sont conservées à -20°C.
Pour améliorer la solubilité, réchauffez le tube à 37°C et soniquez-le pendant une durée appropriée.
Calculateurs (Calculators)Molarité / Dilution / Masse moléculaire / Conversion d’unités / Formulation in vivo / Solubilité
Reviews
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