Polyethylenimine linear (MW:10000)

Ce plan sert uniquement de guide, veuillez le modifier en fonction de vos besoins spécifiques.

1. Préparation de la solution

(1) Préparation de la solution de stockage : Équilibrer le solide cryoconservé à température ambiante, utiliser de l'eau stérile pour dissoudre le polyéthylènimine linéaire et préparer une solution de stockage avec une concentration de 1 mg/mL.

Remarque : La solution de stockage non utilisée doit être aliquotée et conservée dans l'obscurité à -20°C ou -80°C pour éviter les cycles répétés de congélation et décongélation.

(2) Préparation de la solution de travail : Avant l'expérience formelle, diluer la solution de stockage avec de l'eau stérile (ou du milieu sans sérum) jusqu'à la concentration de travail requise, par exemple : 250 μg/mL.

Remarque : Ajustez la concentration de travail optimale en fonction de la situation réelle ou référez-vous à la littérature pour établir vous-même un gradient de concentrations à explorer. La solution de travail doit être préparée et utilisée immédiatement.

2. Étapes pour la transfection transitoire des cellules 293T à l'aide de Polyéthylènimine linéaire [1] (d'après la littérature, à titre de référence uniquement)

(1) Ensemencement des cellules : La veille de la transfection, ensemencer les cellules 293T en phase de croissance exponentielle dans une boîte de culture de 6 cm de diamètre. Assurez-vous que la croissance cellulaire atteint 50-70 % de confluence.

(2) Changer le milieu de culture : Retirer le milieu de culture des cellules et le remplacer par un milieu de culture sans sérum.

(3) Préparation du complexe ADN-PEI : Préparer 240 μL de solution d'ADN (32 μg/mL). Ajouter 180 µL de solution de PEI stérile (250 µg/mL). Agiter légèrement au vortex pour mélanger, et incuber à température ambiante pendant 30 minutes.

(4) Ajouter le complexe ADN-PEI : Ajouter le complexe goutte à goutte sur les cellules et incuber dans un incubateur avec 5 % de CO₂ pendant 6 heures.

(5) Remplacement du milieu de culture : Après 6 heures, remplacer le milieu de culture contenant le complexe ADN-PEI par un milieu de culture DMEM complété avec du sérum de veau fœtal (FBS).

(6) Culture et expression génique : Poursuivre la culture dans un incubateur à CO₂ pendant 48 heures, puis analyser l'expression génique.

Remarque : Ce protocole expérimental est fourni à titre de référence pour l'utilisation du polyéthylènimine linéaire dans des expériences de transfection cellulaire. Veuillez modifier les étapes spécifiques selon les besoins expérimentaux. Veuillez effectuer les expériences de contrôle nécessaires, y compris les cellules non traitées et les cellules utilisant des réactifs de transfection connus et efficaces, pour évaluer l'efficacité de la transfection et la cytotoxicité.

Références :

[1] Wang W, Zheng Q, Yu C, et al. WSV056 Inhibits Shrimp Nitric Oxide Synthase Activity by Downregulating [J]. Frontiers in Microbiology, 2021, 12: 796049.