PPACK (Synonyms: Pebac, D-Phenylalanyl-prolyl-arginyl Chloromethyl Ketone) |
Catalog No.GC44671
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PPACK est un puissant inhibiteur sélectif et irréversible de la thrombine qui inhibe la thrombine alpha humaine avec une valeur Ki de 0,24 nM.
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Cas No.: 71142-71-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
PPACK est un puissant inhibiteur sélectif et irréversible de la thrombine qui inhibe la thrombine alpha humaine avec une valeur Ki de 0,24 nM. PPACK inhibe la liaison du rt-PA aux inhibiteurs de protéases plasmatiques in vitro[1-3]. Il forme une liaison covalente avec le Ser du site actif de la thrombine et se réticule avec l'His57 du site actif pour former un complexe tétraédrique PPack-thrombine. PPACK inhibe complètement les changements dans les produits de dégradation de la fibrine, le plasminogène et l'alpha 2-antiplasmine[4-6].
a coïncubation avec PPACK (0,2 mM;2h) a réduit de 59% l'augmentation de la perméabilité endothéliale induite par la plasmine dans les cellules endothéliales de l'aorte bovine[7]. L'hème oxygénase (HO)-1 est une enzyme limitant le taux de dégradation de l'hème, inductible au stress, qui confère une cytoprotection contre les lésions oxydatives. Le prétraitement des cellules avec PPACK (24h ; 30 nM) a efficacement antagonisé l'effet potentialisateur de la thrombine sur l'expression de l'HO-1[8].
Le prétraitement à PPACK (dose bolus de 10-100 μg/kg ou perfusion de 0,25-1,0 μg/kg/min) peut inhiber la thromboembolie cérébrale induite par la thrombine chez le lapin[9].
References:
[1]. Mohler MA, Refino CJ, et,al. D-Phe-Pro-Arg-chloromethylketone: its potential use in inhibiting the formation of in vitro artifacts in blood collected during tissue-type plasminogen activator thrombolytic therapy. Thromb Haemost. 1986 Oct 21;56(2):160-4. PMID: 2433785.
[2]. Bode W, Mayr I, et,al. The refined 1.9 A crystal structure of human alpha-thrombin: interaction with D-Phe-Pro-Arg chloromethylketone and significance of the Tyr-Pro-Pro-Trp insertion segment. EMBO J. 1989 Nov;8(11):3467-75. doi: 10.1002/j.1460-2075.1989.tb08511.x. PMID: 2583108; PMCID: PMC401503.
[3]. Lyon ME, Fine JS, et,al. D-phenylalanyl-L-prolyl-L-arginine chloromethyl ketone (PPACK): alternative anticoagulant to heparin salts for blood gas and electrolyte specimens. Clin Chem. 1995 Jul;41(7):1038-41. PMID: 7600685.
[4]. Kovach IM, Kelley P, et,al. Proton bridging in the interactions of thrombin with small inhibitors. Biochemistry. 2009 Aug 4;48(30):7296-304. doi: 10.1021/bi900098s. PMID: 19530705; PMCID: PMC2800789.
[5]. Kettner C, Shaw E. D-Phe-Pro-ArgCH2C1-A selective affinity label for thrombin. Thromb Res. 1979;14(6):969-73. doi: 10.1016/0049-3848(79)90014-8. PMID: 473131.
[6]. Nienaber VL, Mersinger LJ, et,al. Structure-based understanding of ligand affinity using human thrombin as a model system. Biochemistry. 1996 Jul 30;35(30):9690-9. doi: 10.1021/bi952164b. PMID: 8703940.
[7]. Rabbani LE, Johnstone MT, et,al. PPACK attenuates plasmin-induced changes in endothelial integrity. Thromb Res. 1993 Jun 15;70(6):425-36. doi: 10.1016/0049-3848(93)90085-3. PMID: 8362368.
[8].Liu JF, Hou SM, et,al. Thrombin induces heme oxygenase-1 expression in human synovial fibroblasts through protease-activated receptor signaling pathways. Arthritis Res Ther. 2012 Apr 27;14(2):R91. doi: 10.1186/ar3815. PMID: 22541814; PMCID: PMC3446465.
[9]. Liu JT, Paul W, et,al. Thrombin inhibitors and anti-coagulants on thrombin-induced embolisation in rabbit cranial vasculature. Eur J Pharmacol. 1994 Oct 24;264(2):183-90. doi: 10.1016/0014-2999(94)00464-1. PMID: 7851481.
| Procédures cinétiques (inhibition de la thrombine par le PPACK) [1]: | |
Méthode de préparation | La solution mère de thrombine a été diluée dans le tampon approprié, ce qui a donné une solution de 20 mL avec une concentration de 3-5×10-10 M. Une aliquote de 980 μL a été incubée dans une cuvette dans le compartiment cellulaire à température contrôlée du spectrophotomètre pour atteindre l'équilibre thermique. L'inhibition de la thrombine a été initiée en injectant 10 μL d'une solution de PPACK de 1,1 × 10-7 à 3,65 × 10-7 M thermiquement équilibrée et en mélangeant. Le mélange réactionnel a été rapidement incubé pendant un intervalle de temps compris entre 15 et 200 s, après quoi 10 μL d'une solution de substrat à 3-5×10-3 M dans du DMSO ont été rapidement ajoutés pour mesurer l'activité enzymatique restante. Les constantes de vitesse du pseudo-premier ordre ont été calculées en ajustant la fonction exponentielle à l'activité enzymatique restante en fonction du temps d'inhibition pour 10 temps d'incubation successifs. L'activité de la thrombine est restée constante pendant toute la durée de l'expérience dans la plage de température 288-308 K. |
Applications | PPACK est un puissant inhibiteur sélectif et irréversible de la thrombine qui inhibe la thrombine alpha humaine avec une valeur Ki de 0,24 nM. |
| Expériences cellulaires [2]: | |
Lignées cellulaires | Cellules endothéliales de l'aorte bovine |
Méthode de préparation | Des monocouches de cellules endothéliales aortiques bovines confluentes ont été obtenues trois à cinq jours après l'ensemencement sur les plaques à membrane en polycarbonate. Les cellules ont été traitées avec du plasminogène et un activateur du plasminogène. Les PPACK ont été ajoutés dans les compartiments supérieurs. Les monocouches ont ensuite été incubées pendant deux heures dans une atmosphère à 5 % de CO2 / 95 % d'O2. |
Conditions de réaction | 0.2 mM;2h |
Applications | La coïncubation avec PPACK a réduit de 59 % l'augmentation de la perméabilité endothéliale induite par la plasmine. |
| Expériences cellulaires [3]: | |
Lignées cellulaires | Fibroblastes synoviaux humains atteints d'arthrose (OASF) |
Méthode de préparation | Les cellules ont été traitées avec de la thrombine (3 U/ml), de la thrombine et du PPACK (30 nM) pendant 24 heures. |
Conditions de réaction | 24h; 30 nM |
Applications | Le prétraitement des cellules avec PPACK a efficacement antagonisé l'effet potentialisateur de la thrombine sur l'expression de HO-1. |
| Expériences animales [4]: | |
Modèles animaux | Lapins mâles |
Méthode de préparation | PPACK a été préparé dans une solution saline et administré en bolus de 10 à 100 μg/kg ou en perfusion de 0,25 à 1,0 μg/kg/min. Les lapins ont été traités avec le bolus de PPACK 1 min avant ou après l'administration de thrombine ou ont été perfusés avec PPACK en commençant 30 min avant l'administration de thrombine et en continuant pendant 1 h à un taux de 0,1 mL/min. |
Applications | Le prétraitement par PPACK peut inhiber la thromboembolie cérébrale induite par la thrombine chez le lapin. |
Références : | |
| Cas No. | 71142-71-7 | SDF | |
| Synonymes | Pebac, D-Phenylalanyl-prolyl-arginyl Chloromethyl Ketone | ||
| Chemical Name | D-phenylalanyl-N-[(1S)-4-[(aminoiminomethyl)amino]-1-(2-chloroacetyl)butyl]-L-prolinamide, trifluoroacetate salt | ||
| Canonical SMILES | O=C([C@H](N)CC1=CC=CC=C1)N2[C@H](C(N[C@H](C(CCl)=O)CCCNC(N)=N)=O)CCC2 | ||
| Formula | C21H31ClN6O3 | M.Wt | 451 |
| Solubility | 20mg/mL in ethanol, 33mg/mL in DMSO, or in DMF | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.2173 mL | 11.0865 mL | 22.1729 mL |
| 5 mM | 443.5 μL | 2.2173 mL | 4.4346 mL |
| 10 mM | 221.7 μL | 1.1086 mL | 2.2173 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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