ARCA (Synonyms: Anti Reverse Cap Analog, 3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')G) |
Catalog No.GC16608
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ARCA는 반대 방향 캡 유사체로 작용하는 5' 캡 유사체이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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ARCA는 반대 방향 캡 유사체로 작용하는 5' 캡 유사체이다. ARCA는 체외 전사 과정에서 캡 구조가 mRNA의 5' 말단에 올바른 방향으로 연결되도록 보장한다. m7G의 3'-OH 위치에 메틸기를 도입해서 ARCA는 mRNA의 5' 말단에 대한 올바른 방향성 부착을 보장하고 체외 전사할 때 역방향 삽입을 방지한다. ARCA는 mRNA의 번역 효율과 안정성을 향상시킨다. ARCA는 암, 감염병 및 mRNA 백신 관련 연구에 사용될 수 있다[1-4].
ARCA를 사용해서 올바른 방향의 캡 구조를 가진 mRNA를 제조하는 방법[1]
본 프로토콜은 참고용으로만 제공됩니다. 실제 필요에 따라 조정하시기 바랍니다.
(1) 시약 준비: ARCA를 물 또는 적절한 버퍼에 용해해서 0.5 mM 스톡 용액을 제조합니다. 0.5 mM ATP, 0.5 mM CTP, 0.5 mM UTP 및 0.1 mM GTP가 포함된 NTP 혼합물을 준비합니다 (ARCA 대 GTP의 몰 비율 5:1). SP6 또는 T7 RNA 폴리머라제, DNA 주형, RNase 억제제 및 전사 버퍼를 준비합니다.
(2) 체외 전사 반응 체계 구축: 전사 버퍼에 600 ng의 DNA 주형, 1 U/μL RNase 억제제, 0.5 mM ATP/CTP/UTP, 0.1 mM GTP 및 0.5 mM ARCA를 첨가합니다. 이 후에 SP6 또는 T7 RNA 폴리머라제를 첨가합니다.
(3) mRNA 합성: 37°C에서 1시간 동안 배양합니다. 2 μL의 DNase를 첨가한 후 주형 DNA를 제거하기 위해 37°C에서 20분 동안 배양합니다. RNA 산물을 정제하고 올바른 방향을 가진 ARCA 캡 구조의 mRNA를 얻습니다.
(4) ARCA 캡 결합 mRNA의 번역 검증: ARCA 캡 결합 mRNA를 HEK293 세포(DMEM + 10% FBS; 37°C; 5% CO2)에 형질 전환하거나 토끼 망상적혈구 용해액을 첨가해서 30°C에서 60분 동안 배양합니다. 루시페라제 발광 값을 통해 번역 효율을 평가합니다. RT-qPCR을 통해 HEK293 세포 내 잔류 mRNA 비율을 검출해서 안정성을 평가합니다.
주의 사항:
(1) RNA 분해를 방지하기 위해 실험 전반에 걸쳐 RNase-free 소모품을 사용해서 모든 조작은 얼음 위에서 수행해야 합니다.
(2) 안전과 건강을 위해 작업할 때 실험복과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
| Cas No. | SDF | ||
| Synonyms | Anti Reverse Cap Analog, 3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')G | ||
| Canonical SMILES | OC1C(COP([O-])(OP([O-])(OP([O-])(OCC2OC(N3C=[N+](C)C4=C3N=C(N)NC4=O)C(O)C2OC)=O)=O)=O)OC(N5C=NC6=C5N=C(N)NC6=O)C1O | ||
| Formula | C22H32N10O18P3 (free acid) | M.Wt | 817.4 g/mol (free acid) |
| Solubility | Storage | Store at -20°C | |
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.2234 mL | 6.117 mL | 12.2339 mL |
| 5 mM | 244.7 μL | 1.2234 mL | 2.4468 mL |
| 10 mM | 122.3 μL | 611.7 μL | 1.2234 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A liquid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 31 reference(s) in Google Scholar.)