Calf thymus DNA

핵효소 활성 검사[1]：

1.용액 준비: 송아지 흉선 DNA를 무균 초순수(디나제 I가 없는)에 녹여 1mg/mL 용액을 준비합니다. 용해 과정에서 4°C에서 부드럽게 뒤집어주면 용해를 돕고 초음파와 격렬한 진동은 피합니다. 4°C에서 밤새 배양 후에는 완전히 녹을 수 있습니다;

노트: 농도가 낮을 때(25μg/mL), DNA는 플라스틱관 내벽에 흡착하기 쉽습니다. DNA는 pH가 8.0보다 큰 용액에서 쉽게 분해되기 때문에 알칼리성 용액에서는 녹일 수 없습니다.

2. 음성 대조 그룹: 7.5μg (1mg/mL 용액에서 7.5μL)의 송아지 흉선 DNA를 Tris 50μL와 혼합합니다; 양성 대조 그룹: 7.5μg (1mg/mL 용액에서 7.5μL)의 송아지 흉선 DNA를 Tris 40μL과 DNase I (2U/mL) 10μL과 혼합합니다;

3.모든 시료를 37°C에서 6시간 동안 배양합니다;

4.배양 후 완전한 DNA는 페놀-클로로폼으로 침전시킵니다;

5.DNA는 Roti-Gel Stain을 포함한 1% 아가로스 겔에서 시각화됩니다;

6. 상대적 핵효소 활성은 표준 핵효소 활성(0, 0.015, 0.03, 0.06, 0.125, 0.25, 0.5 그리고 1U/mL의 DNase I)과 비교해서 결정됩니다.

이 프로토콜은 단지 지침을 제공하고 필요에 따라 수정해야 합니다.

References:
[1] Fingerhut L, Ohnesorge B, von Borstel M, et al. Neutrophil Extracellular Traps in the Pathogenesis of Equine Recurrent Uveitis (ERU). Cells. 2019;8(12):1528. Published 2019 Nov 27.