인용 문헌 (Citations)
6 publications이 제품을 사용한 연구자들의 논문제품 설명 (Description)
Coelenterazine은 천연의 세포 투과성 해양 루시페린이다. Coelenterazine은 다양한 루시페라제 또는 광단백질의 기질이다. Coelenterazine은 칼슘 이온 및 활성산소 검출용 탐침이다(Ex/Em=429/466 nm). Coelenterazine은 리포터 유전자 분석, 생체 내 생체발광 영상, Ca²⁺ 검출, BRET 및 산화 스트레스 관련 연구에 사용될 수 있다[1-4].
실험 프로토콜 (Protocol)
Coelenterazine 사용 프로토콜[1-3]
본 프로토콜은 참고용으로만 제공되고 특정 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.
염색 용액 제조:
(1) Coelenterazine을 메탄올에 용해해서 4.7 mM 원액을 제조합니다. 노트: 사용하지 않은 원액은 등분해서 -20°C 또는 -80°C에서 빛을 차단하여 보관합니다. 반복적인 동결-융해 주기를 피하도록 합니다.
(2) 원액을 0.1 M 인산칼륨 완충액으로 희석해서 0.4 μM에서 2.5 μM 범위의 작업 용액을 제조합니다. 노트: 실제 조건에 따라 작업 농도를 조정하십시오. 사용전마다 신선하게 제조해야 합니다.
미토콘드리아 반응성 산소 종류 검출(쥐 심장 미토콘드리아를 예로 들어):
(1) 쥐 심장 미토콘드리아 또는 아미토콘드리아 입자(SMP)를 분리합니다. 단백질 농도를 약 5 mg/mL로 조정합니다.
(2) 1 mg의 미토콘드리아 또는 SMP 소생시킨 용액을 2.5 μM Coelenterazine과 2 mg/mL NADH에 첨가합니다. 즉시 15초 이내에 누적 형광 신호를 측정합니다.
세포 염색:
(1) 렌딜라 루시페라제를 발현하는 세포를 배양합니다. 무색 용액으로 세포를 1회 세척합니다.
(2) 0.4 μM Coelenterazine을 첨가합니다. 즉시 37°C에서 빛을 차단해서 6시간 배양합니다.
(3) 생체 발광 이미징 시스템을 사용해서 영상을 획득합니다.
생체 내 쥐 영상:
(1) 렌딜라 루시페라제를 안정적으로 발현하는 이종 이식 종양을 가진 쥐의 꼬리 정맥을 통해 2 mg/kg Coelenterazine을 주사합니다.
(2) Coelenterazine이 체내에서 약 5분 동안 순환하도록 합니다. 생체 발광 이미징 시스템을 사용해서 정위 종양과 전이를 촬영합니다. 희생 후 주요 장기를 균질화합니다. 50 μL Coelenterazine 기질과 10 μL 조직 용해액을 혼합합니다. 발광계로 정량합니다.
주의 사항:
(1) 동물 실험은 동물 복지 지침을 준수해야 합니다.
(2) 안전과 건강을 위해 작업 중 실험복과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
제품 문서 (Product Documents)
생물학적 데이터 (Biological Data)
화학적 특성 (Chemical Properties)
계산 도구 (Calculators)몰 농도 / 희석 / 분자량 / 단위 변환 / 생체 내 제형 / 용해도
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