인용 문헌 (Citations)
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FCCP는 매우 친지질성인 미토콘드리아 언커플러이다. FCCP는 미토콘드리아 내막에서 양성자 운반체로 작용해서 양성자를 수송하고 미토콘드리아 막 전위와 pH 구배를 소산시켜서 전자 전달과 ATP 합성을 결합한다. 게다가 ATP 생성을 억제해서 산소 소비를 증가시키고 미토콘드리아 ATP 합성을 감소시켜 에너지 스트레스를 유발해서 AMPK 및 기타 에너지 감지 노드고 HIF 신호 전달에도 영향을 미친다. FCCP는 미토콘드리아 기능, 세포 에너지 대사, 저산소증 신호 전달 및 종양 대사 연구에 사용될 수 있다[1-4].
체외 실험에서 HuH6, Hep3B, HepG2 및 HLE 세포를 1μM의 FCCP와 젬시타빈으로 16-48시간 동안 공동 처리하한 후 젬시타빈에 의해 유도된 미토콘드리아 슈퍼옥사이드 생성이 억제되고 젬시타빈에 의한 세포 성장 억제에 대한 내성이 유도되었다[5]. 니클로사마이드로 전처리한 HEK293T 세포를 10μM의 FCCP로 1시간 처리하면 최대 세포 호흡률이 감소하였다[6]. 4T1 또는 B16 세포를 0.5μM의 FCCP로 30분 처리한 후 탈커플링된 산소 소비율이 최고치에 도달하였다[7].
체내 실험에서 C57BL/6 쥐와 PINK1 결핍 (PINK1-/-) 쥐에게 1일 동안 1mg/kg의 FCCP를 하루 두 번 복강 주사한 후 파킨이 심장 미토콘드리아로 전위되었고 이는 미토콘드리아 단백질의 유비퀴틴화 증가 및 자식 단백질인 LC3II의 미토콘드리아 결합 증가를 동반하였다. 야생형 및 PINK1-/- 쥐의 심장에 100nM의 FCCP를 5-15분 동안 후퇴성 대동맥 퍼퓨전을 시행하고 내인성 PINK1의 미토콘드리아 축적 없이 파킨이 심장 미토콘드리아 분획에 빠르게 축적되었다[8].
실험 프로토콜 (Protocol)
| 세포 실험 [1]: | |
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세포주 |
HuH6,Hep3B, HepG2, HLE 세포 (인간 간세포암 세포 라인) |
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준비 방법 |
HuH6, Hep3B, HepG2 및 HLE 세포는 10% FBS가 보충된 Dulbecco's Modified Eagle Medium에서 37°C, 5% CO₂ 조건 하에서 배양하였습니다. 세포를 96-웰 판에 파종하고 1μM의 젬시타빈 단독 또는 FCCP (4-trifluoro-methoxy-phenyl-hydrazone)와 병용해서 16시간 (미토콘드리아 슈퍼옥사이드 분석) 또는 48시간 (세포 성장 억제 분석) 동안 처리하였습니다. 처리한 후 MitoSox Red (Catalog No. GC68230)를 사용해서 미토콘드리아 슈퍼옥사이드를 측정해서 MTT (Catalog No. GC14731) 분석을 통해 세포 성장을 측정하였습니다. |
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반응 조건 |
1μM; 16 시간 또는 48 시간 동안 |
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적용 |
FCCP와 젬시타빈의 공동 처리는 HuH6, Hep3B, HepG2 및 HLE 세포에서 젬시타빈에 의해 유도된 세포 성장 억제에 대한 내성을 유도하였습니다. 게다가 FCCP와 젬시타빈의 공동 처리는 HuH6, Hep3B, HepG2 및 HLE 세포에서 젬시타빈에 의해 유도된 미토콘드리아 슈퍼옥사이드 생성을 방지하였습니다. |
| 동물 실험 [2]: | |
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동물 모델 |
양생형 C57BL/6 쥐, PINK1-결핍 (PINK1-/-) 쥐 |
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준비 방법 |
쥐에게 생리식염수에 녹인 1mg/kg의 FCCP를 하루 두 번 복강 주사하였습니다. 마지막 투여는 조직 채취 1시간 전에 실시하였습니다. 심장을 적출해서 Krebs-Henseleit 완충액으로 대동맥 역행 관류를 5분 동안 평형화한 후 100nM의 FCCP가 포함된 관류액으로 5분 또는 15분 동안 관류하였습니다. 심실 조직을 사용하여 미토콘드리아를 분리해서 Parkin, PINK1, 유비퀴틴, LC3II, Tom20, 복합체 마커 및 GAPDH에 대해 단백질 자극법을 수행하였습니다. |
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제형 |
1mg/kg; i.p.; 1일 동안 매일 2번 100nM; 심장 퍼퓨전, 5분 또는 15분 동안 |
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적용 |
FCCP 투여는 야생형 및 PINK1-/- 심장의 미토콘드리아 분획에서 파킨 수치를 증가시켰습니다. FCCP 퍼퓨전은 5분 또는 15분 시점에 야생형 심장의 미토콘드리아에 내인성 PINK1을 축적시키지 않았습니다. 체내 FCCP 투여는 야생형 및 PINK1-/- 심장의 미토콘드리아로의 파킨 전위를 증가시켰고 미토콘드리아 단백질의 유비퀴틴화를 증가시켜서 야생형 및 PINK1-/- 심장에서 LC3II와 미토콘드리아의 결합을 증가시켰습니다. |
제품 문서 (Product Documents)
화학적 특성 (Chemical Properties)
저장 용액은 -80°C 보관 시 6개월 이내, -20°C 보관 시 1개월 이내에 사용하십시오.
용해도를 높이려면 튜브를 37°C로 데운 뒤 적절한 시간 동안 초음파 처리하십시오.
계산 도구 (Calculators)몰 농도 / 희석 / 분자량 / 단위 변환 / 생체 내 제형 / 용해도
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