LDS-751

이 프로토콜은 가이드이고 구체적인 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.

1.LDS 751 염색 용액 준비

(1) LDS 751 염료 저장 용액 준비: 5.297mL DMSO를 사용하여 25mg LDS 751을 완전히 녹여 10mM 저장 용액을 얻습니다.

참고: LDS 751 저장 용액을 -20℃의 어두운 곳에 분사 후 반복되는 냉동과 해동을 피하기 위해 보관하는 것이 좋습니다.

(2) LDS 751 작업 용액 준비: 예열된 무혈청은 배양 기재나 버퍼(HBSS나 PBS 등)를 사용하여 저장 용액을 희석하고 농도가 10μM인 LDS 751 작업 용액을 준비합니다.

참고: 실제 상황에 따라 LDS 751 작업 용액의 농도를 조정하고 사용 전에 준비하시기 바랍니다.

2.세포 착색

2.1 수정세포 (6월 판을 예로 들음)

(1) 수정세포를 1000g으로 3-5분간 세분화합니다. 상청을 버리고 PBS로 매번 5분간 두 번 세척합니다.

(2) 1mL의 LDS 751 작업 용액을 추가하고 실온에서 어두운 곳에서 15-60분 동안 부화시킵니다.

(3) 배양 후 1000g으로 5분간 원심 분리하여 상청을 제거하고 PBS로 2-3번 매번 5분간 세척합니다.

(4) 세포를 무혈청은 세포 배양 기재나 PBS에서 재수정하고 형광효소 표지판 또는 유세포측정기로 관찰합니다.

2.2 접착세포

(1)멸균된 슬라이드에 접착세포를 배양합니다.

(2) 배양기에서 슬라이드를 제거하고 과도한 배양기재를 흡인하여 슬라이드를 습한 환경에 놓습니다.

(3) 슬라이드의 한 구석에 LDS 751 작업 용액 100uL를 추가하고 살짝 흔들어 모든 세포를 염료로 균일하게 덮고 실온에서 어둠에서 15-60분 동안 배양합니다.

(4) 염료 작업 용액을 흡인하고 배양기재로 슬라이드를 2-3번 세척하고 형광효소라벨링판 또는 유세포측정기로 관찰합니다.

3.형광 ELISA 판 검출: LDS 751의 자극/발광광은 각각543/712nm (DNA에 결합)입니다.

참고:

(1) 고정된 세포나 조직 샘플의 스테이닝 후 고정제를 제거하기 위해 씻어주세요;

(2) 형광 끈기 현상을 늦추기 위해 형광 억제 실링제를 사용하는 것이 추천됩니다;

(3) LDS 751은 인체에 자극을 줍니다. 안전과 건강을 위해 수술시 실험가운과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다;

(4) 처음 실험할 때는 몇 가지의 작업 농도를 시도해 최적의 작업 농도를 결정하시기 바랍니다. 높은 농도는 세포 구조의 비특정적 염색을 일으킬 수 있습니다.