PD-1/PD-L1 inhibitor 1 (BMS-1)

세포주

준비 방법

4T1 세포와 BMDM2 세포는 10% FBS가 보충된 RPMI-1640 배양지에서 37°C, 5% CO₂ 조건 하에서 배양하였습니다. 세포를 먼저 2μM의 PD-1/PD-L1 inhibitor 1(10μg/mL CNH-PG 함유)으로 30분간 전처리한 후 808nm 레이저(1.3W/cm² 또는 1.5W/cm²)로 10분간 조사하고 24시간 계속 배양하였습니다. 세포 생존율은 CCK-8로 측정하였습니다; 세포 증식과 세포 사멸은 CFSE 감소 및 안낵신 V 염색을 유세포 측정법으로 평가하였습니다; PD-L1, γH2AX, 분열된 시스테인 3, BAX, BCL2 및 GAPDH는 단백질 자극법과 유세포 측정법으로 검출하였습니다; 표면 PD-L1은 면역형광 염색과 유세포 측정법으로 측정하였습니다. 동일한 처리를 받은 BMDM2 세포(단독 또는 4T1과 공배양)를 F4/80, CD80, CD86, CD206으로 염색하고 단백질 자극법으로 iNOS, GBP5, ARG1을 평가하였고 유세포 측정법으로 형광 라텍스 비즈의 식작용을 평가하였습니다.

반응 조건

적용

4T1 세포에서 PD-1/PD-L1 inhibitor 1과 CNH-PG를 병용한 온화한 광열요법은 세포 독성을 증가시키고 증식을 억제시켜서 안넥신 V 양성율을 증가시키고 γH2AX, 분열된 시스테인 3, BAX를 상향 조절해서 BCL2를 하향 조절시켰고 CNH-PG-mPT에 의해 유도된 총 PD-L1 및 표면 PD-L1 상향 조절을 억제하였습니다. BMDM2 세포에서 PD-1/PD-L1 inhibitor 1과 CNH-PG를 병용한 후 독성이 나타나지 않았습니다. BMDM2 세포(단독 또는 4T1과 공배양)에서 PD-1/PD-L1 inhibitor 1과 CNH-PG-mPT를 병용한 후 CNH-PG-mPT에 의해 유도된 PD-L1 상향 조절을 억제해서 M1형 표현형을 증진시켰고 이변화는 공배양에서 현저하게 나타났습니다.

동물 모델

준비 방법

쥐는 이틀마다로 10mg/kg의 PD-1/PD-L1 inhibitor 1을 복강 내 주사해서 14일 연속 처리하였습니다(대조 그룹은 격일로 PBS 또는 250mg IgG를 복강 내 투여하였습니다). 최종 주사 후 24시간에 쥐를 안락사시켰습니다; 체중, 식이 섭취량, 심장 무게/체중 비율, 종양 무게를 기록하였습니다; 희생 전 심장초음파 검사를 시행해서 박출률, 분획 단축률, LVIDs 및 LVIDd를 측정하였습니다; 심장 조직을 수집하여 H&E 및 마손 염색, TUNEL 염색, RT-PCR(BNP, IL-6, TNF-α, CD31, VEGF), 단백질 자극법(SOCS3, p-JAK/JAK, STAT3, VEGF, GAPDH) 및 유세포 측정법(종양 침윤 대식세포의 CD45, PD-L1, F4/80, CD86, Ly6C, Ly6G)을 수행하였습니다.

제형

10mg/kg; i.p.; 14일 동안 이틀마다

적용

PD-1/PD-L1 inhibitor 1 투여는 쥐의 체중을 감소시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 심장 무게/체중 비율을 증가시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 종양 무게를 감소시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 쥐의 박출률과 분획 단축률을 감소시키고 LVIDs와 LVIDd를 증가시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 심근 내 BNP mRNA, IL-6 mRNA 및 TNF-α mRNA를 증가시키고 심근 내 CD31 및 VEGF mRNA를 감소시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 심근 내 SOCS3, p-JAK/JAK 및 STAT3 단백질 수준을 감소시키면서 VEGF 단백질을 증가시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 심장 절편의 심근 섬유화 면적, TUNEL-양성 세포사멸 면적 및 염증 병소 면적을 증가시켰습니다. PD-1/PD-L1 inhibitor 1은 종양 조직 내 CD86⁺MHCII⁺ 대식세포 비율을 증가시켰습니다.