DDAO |
Catalog No.GC61840
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DDAO es una sonda fluorescente roja de infrarrojo cercano (NIR) con longitud de onda de excitación sintonizable (600-650nm) y longitud de onda de emisión larga (λem=656nm) y un pKa relativamente bajo (~5).
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 118290-05-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DDAO es una sonda fluorescente roja de infrarrojo cercano (NIR) con longitud de onda de excitación sintonizable (600-650nm) y longitud de onda de emisión larga (λem=656nm) y un pKa relativamente bajo (~5)[1]. DDAO se puede utilizar para detectar las actividades de diferentesenzimas, como la β-galactosidase, sulfatase, protein phosphatase 2A, carboxylesterase 2, human albumin y esterase. Existe una relación lineal entre la concentración de proteína fosfatasa 2A (PP-2A) y la fluorescencia inducida por DDAO[2]. DDAO se puede utilizar para estudiar la fagocitosis de las células cancerosas por los macrófagos [3]. DDAO se puede utilizar para estudiar la proliferación de células B [4].
References:
[1]?Hou J, Qian M, Zhao H, et al. A near-infrared ratiometric/turn-on fluorescent probe for in vivo imaging of hydrogen peroxide in a murine model of acute inflammation[J]. Analytica Chimica Acta, 2018, 1024: 169-176.
[2]?Leira F, Vieites J M, Vieytes M R, et al. Characterization of 9H-(1, 3-dichlor-9, 9-dimethylacridin-2-ona-7-yl)-phosphate (DDAO) as substrate of PP-2A in a fluorimetric microplate assay for diarrhetic shellfish toxins (DSP)[J]. Toxicon, 2000, 38(12): 1833-1844.
[3]?Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[4] Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B‐cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
Este plan solo proporciona una guía, por favor modifíquela para satisfacer sus necesidades específicas.
1. Preparación de la solución
(1) Solución de stock: Disolver DDAO en DMSO para preparar una solución de stock con una concentración de 5mM.
Nota: Después de que la solución de stock no utilizada se haya alícuota, guárdela a -20°C o -80°C en la oscuridad para evitar la congelación y descongelación repetidas.
(2) Solución de trabajo: Antes del experimento formal, diluya la solución original con un tampón adecuado (como medio libre de suero o PBS) a la concentración de trabajo requerida, como 1μM.
Nota: Por favor, ajuste la concentración de trabajo óptima de acuerdo con la situación real o consulte la literatura para establecer la concentración de gradiente usted mismo. La solución de trabajo debe prepararse y utilizarse de inmediato.
2. Uso de DDAO para estudiar el efecto fagocítico de los macrófagos en las células cancerosas[1](de la literatura, solo como referencia)
(1) 0.8×106 celdas RAW264.5 o 1×106 THP1 se sembraron en placas de 6 pozos.
(2) Después de la incubación durante 24h, las células RAW264.7 se trataron con lipopolisacáridos (LPS) de 0.1μg/mL durante 24 horas para activarlas. Las células THP1 se diferenciaron mediante tratamiento con 40nM de forbol 12-myristate 13-acetate (PMA) durante 48h.
(3) Los macrófagos activados se tiñeron con DiO (Cat. No. GC19515) a una concentración final de 40nM en medio de cultivo durante 20 minutos y luego enjuagado tres veces con medio de cultivo.
(4) Las células cancerosas se etiquetaron con 1μM DDAO (5mM de stock, DMSO, almacenado a −20°C) en PBS a 37°C durante 15 minutos y luego se lavaron con PBS que contenía 1% de FBS.
(5) Las células diana marcadas con DDAO (1×106) se añadieron a macrófagos teñidos con DiO (Mφ) y se incubaron a 37°C en un volumen final de 2mL durante 2h.
(6) Después de la incubación, el Mφ y las células diana se cosecharon lavando tres veces con EDTA-PBS y luego se digirieron con tripsina al 0.25%.
(7) La citometría de flujo se utilizó para evaluar las células de doble marcado (DIO+/DDAO+), que representan células cancerosas envueltas por Mφ maduro.
3. Uso de DDAO para estudiar la proliferación de células B [2](de la literatura, solo como referencia)
(1) Las células B se etiquetaron con 1μM DDAO y se cultivaron en RPMI completo suplementado con 4μg/mL CD40L, 100ng/mL BAFF, 1μg/mL anti-IgM or 2.5μg/mL CpG.
(2) Después de 3 días de cultivo, la dilución de DDAO (y la expresión de mCherry en células B dirigidas a CRISPR) se midió mediante citometría de flujo.
| Cas No. | 118290-05-4 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1C(Cl)=C2C(C)(C)C3=C(C=CC(O)=C3)N=C2C=C1Cl | ||
| Formula | C15H11Cl2NO2 | M.Wt | 308.16 |
| Solubility | DMSO : 10.42 mg/mL (33.81 mM) | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2451 mL | 16.2253 mL | 32.4507 mL |
| 5 mM | 649 μL | 3.2451 mL | 6.4901 mL |
| 10 mM | 324.5 μL | 1.6225 mL | 3.2451 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 38 reference(s) in Google Scholar.)