Este protocolo describe el uso del tinte azul isosulfano para el mapeo de ganglios linfáticos centinela en cirugía de cáncer de mama. Las condiciones reales de aplicación pueden requerir optimización dependiendo del tipo de cáncer y del diseño del estudio [1-2].
1. Preparación de reactivos y materiales
Solución de isosulfano azul al 1% (p/v) en solución salina estéril (0,9% NaCl), jeringas estériles de 1 ml con agujas de 27-30G, anestesia, ratones portadores de tumor (modelo de cáncer de mama (modelo de 4T1 en ratones BALB/c)
2. Pasos experimentales
(1) Anestesización y posicionamiento
Anestesia al ratón usando isoflurano o ketamina/xilazina. Coloque al ratón en posición supina y asegure las extremidades.
(2) Inyección de tinte
Cargue 20–50µL de Isosulfan Blue en una jeringa. Inyectar por vía subcutánea cerca del sitio del tumor, típicamente peritumoral o periareolar en el modelado de cáncer de mama. Sitio de inyección: la almohadilla de grasa mamaria. Masajee suavemente el área de inyección durante 3-5 minutos para mejorar la absorción linfática.
(3) Migración y disección de tinte
Espere de 10 a 15 minutos para el drenaje linfático. Haga una incisión en la región inguinal o axilar, dependiendo de la ubicación del tumor y el patrón de drenaje esperado. Identifique los vasos linfáticos manchados de azul y sígalos hasta los ganglios linfáticos centinela azules. Extirba y recoger el(los) nodo(s) para el análisis histológico o molecular.
Notas y precauciones
(1) El volumen de la inyección debe ser pequeño para evitar la hinchazón del tejido y la difusión inespecífica.
(2) Utilice una técnica estéril para evitar infecciones.
(3) Evite la inyección intravascular; asegure un parto subcutáneo lento y controlado.
(4) El isosulfano azul puede causar reacciones de hipersensibilidad en casos raros, observe a los animales de cerca.
(5) Utilice los controles apropiados (ratones no inyectados con tinte) para la comparación histológica.
References:
[1]. Hirsch JI, Tisnado J, Cho SR, et al. isosulfan blue for identification of lymphatic vessels: experimental and clinical evaluation. American Journal of Roentgenology. 1982 Dec 1; 39(6): 061-1064.
[2]. Montgomery LL, Thorne AC, Van Zee KJ, et al. Isosulfan blue dye reactions during sentinel lymph node mapping for breast cancer. Anesthesia & Analgesia. 2002 Aug 1; 95(2): 385-388. |
