3-TYP

세포주

준비 방법

H9c2 세포는 10% FBS가 포함된 DMEM 베양지에서 37°C, 5% CO₂ 조건 하에서 배양하였습니다. H9c2 세포를 2.0μg/mL의 구기자 다당체로 48시간 전 배양한 후 10시간 동안 저산소증을 유발하고 2시간 동안 재산소화를 진행하였습니다. H/R 기간 동안 SIRT3를 억제하기 위해 1μM의 3-TYP을 첨가하였습니다. 세포 형태는 광학 현미경으로 관찰하였고 CCK-8 및 EdU 분석을 통해 세포 증식을 평가해서 유세포 분석으로 세포사멸을 평가하혔습니다. 게다가 공동면역침강과 단백질 자극법으로 CypD 라이신-166 아세틸화를 확인하였고 ELISA로 LDH 방출량을 측정해서 Na+-K+-ATPase 활성, Ca2+-ATPase 활성 및 NO 수치를 측정하였습니다.

반응 조건

적용

3-TYP은 H/R에 의해 유도된 세포 형태학적 손상을 악화시켰고 H/R에 의한 세포 증식 억제를 강화하였고 H/R에 의해 유도된 세포사멸율을 증가시켰습니다. 게다가 H/R에 의해 상승된 CypD 아세틸화 수치를 회복시켰고 LBP에 의해 유도된 CypD 탈아세틸화를 차단해서 LDH의 방출량을 증가시켰습니다.

동물 모델

준비 방법

3주령 수컷 C57BL/6J 쥐와 ACE2^-/- 쥐에게 4주 동안 1g/kg의 베타-아미노프로피오니트릴 푸마르산염 (BAPN)이 포함된 음용수를 투여하였습니다. BAPN 처리 기간 동안 3-TYP을 50mg/kg의 용량으로 격일마다 복강 주사하였습니다. 실험 종점에서 다음 지표들을 평가하였습니다: 쥐 생존율, 흉부 대동맥 최대 내경(경흉부 초음파 검사), 육안 해부학적 평가에 의한 박리 발생률, 흉부 대동맥의 H&E 및 EVG 조직 학적 염색, 면역 조직 화학 검사 (CD68, OPN, SM22α, SIRT3) 그리고 흉부 대동맥의 단백질 자극법 분석 (MMP2, MMP9, IL-1β, IL-6, TNF-α, NLRP3, SIRT3, Ac-SOD2).

제형

50mg/kg/번; i.p.; 이틀마다 한번

적용

3-TYP은 흉부 대동맥 박리의 사망률과 발생률을 증가시켜서 흉부 대동맥의 최대 내경을 확대시켰고 H&E 및 EVG 조직학적 손상을 악화시키고 탄성 섬유를 분해하였습니다. 또한 MMP2 및 MMP9 단백질 발현을 증가시켜서 IL-1β, IL-6, TNF-α 및 NLRP3 발현을 상승시켰고 흉부 대동맥에서 OPN을 상향 조절하고 SM22α를 하향 조절하였습니다. 게다가 BAPN으로 처리된 야생형 쥐와 ACE2-/- 쥐에서 SIRT3 발현을 감소시켜서 Ac-SOD2 발현을 증가시켰고 BAPN에 의해 유도된 대동맥 손상 및 VSMC의 표현형 전환에 대한 ACE2 결핍의 보호 효과를 역전시켰습니다.