Ac4ManNAz
Ac4ManNAz (1,3,4,6-tetra-O-acetyl-N-azidoacetylaminomannose)는 아자이드를 포함하는 대사성 당 단백딜 표시제로서 단백질을 선택적으로 수정하여 셀 표시, 추적 및 프로테오믹 분석에 사용할 수 있다. Ac4ManNAz는 아자이드 그룹을 포함하는 클릭 화학 반응제이고 구리(I) 촉매로 인한 아자이드-알킬 싸이클로젠드레이션(CuAAC)반응을 통해 알킬 그룹을 포함하는 분자와 반응할 수 있다.
제품은 연구용으로만 사용됩니다. 인체에 사용할 수 없으며 환자에게 판매하지 않습니다.
| Pack Size | Price | Availability | Quantity | Action |
|---|---|---|---|---|
| 5mg | $135.00 | In Stock | 1 | |
| 10mg | $216.00 | In Stock | 1 | |
| 25mg | $405.00 | In Stock | 1 |
인용 문헌 (Citations)
1 publications이 제품을 사용한 연구자들의 논문제품 설명 (Description)
Ac4ManNAz (1,3,4,6-tetra-O-acetyl-N-azidoacetylaminomannose)는 아자이드를 포함하는 대사성 당 단백딜 표시제로서 단백질을 선택적으로 수정하여 셀 표시, 추적 및 프로테오믹 분석에 사용할 수 있다. Ac4ManNAz는 아자이드 그룹을 포함하는 클릭 화학 반응제이고 구리(I) 촉매로 인한 아자이드-알킬 싸이클로젠드레이션(CuAAC)반응을 통해 알킬 그룹을 포함하는 분자와 반응할 수 있다. Ac4ManNAz는 또한 DBCO나 BCN 그룹을 포함하는 분자와 함께 고리 응력 운용 알킬-아자이드 사이클로젠드레이션(SPAAC) 반응도 진행할 수 있다[4].
클릭 화학은 다양한 결합물을 합성하기 위해 사용할 수 있는 다용도 반응이다. 사실상 모든 생체 분자는 클릭 화학 방법을 사용하여 형광 염료, 비오틴 등과 같이 작은 분자로 쉽게 표시 할 수 있다.
클릭 화학 반응은 두 가지 구성 요소 사이에서 발생합니다. 아지도 그룹과 알키네 그룹 모두 천연 생체 분자에서 거의 마주치지 않는다.게다가 그 반응은 매우 생물학적 직교적이며 특이적이다.
참조 문헌:
[1] Han S S, Lee D E, Shim H E, et al. Physiological effects of Ac4ManNAz and optimization of metabolic labeling for cell tracking[J]. Theranostics, 2017, 7(5): 1164.
[2] Han S S, Shim H E, Park S J, et al. Safety and optimization of metabolic labeling of endothelial progenitor cells for tracking[J]. Scientific reports, 2018, 8(1): 13212.
[3] Singh M S, Chowdhury S, Koley S. Advances of azide-alkyne cycloaddition-click chemistry over the recent decade[J]. Tetrahedron, 2016, 72(35): 5257-5283.
Vidyakina A A, Silonov S A, Govdi A I, et al. Key role of cycloalkyne nature in alkyne-dye reagents for enhanced specificity of intracellular imaging by bioorthogonal bioconjugation[J]. Organic & Biomolecular Chemistry, 2024.
실험 프로토콜 (Protocol)
GlpBio에서 생산한 아자이드를 사용하여 알키인 수정된 올리고핵산이나 DNA에 화학적으로 표시하는 데 다음 일반 프로토콜이 추천됩니다. 이 계획은 가이드를 제공하고 구체적인 요구에 맞게 수정하시기 바랍니다.
1.아래 표를 참고하여 클릭 화학 표시를 위한 반응 물질의 부피를 계산합니다. 필요한 재고 용액을 준비합니다(부록 참조).
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시약 |
혼합물의 최종 농도 |
재고 용액 농도 |
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Oligonucleotide/DNA, alkyne-modified |
Varies (20 — 200 uM) |
Varies |
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Azide |
1.5 x (oligonucleotide concentration) |
10 mM의 DMSO |
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DMSO |
50 vol % |
— |
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Ascorbic acid |
0.5 mM |
5 mM의 물 |
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Cu-TBTA 혼합물 |
0.5 mM |
10 mM의 55 vol % DMSO |
2.밀폐된 비닐에 물에 알키인 수정된 올리고핵산이나 DNA를 녹입니다.
3.최종 농도가 0.2M인 2M 트리에틸아민산 버퍼(pH 7.0)를 추가합니다.
4.DMSO를 추가하고 버블링합니다.
5.아자이드 재고 용액(DMSO 중 10 mM)을 추가하고 버블링합니다.
6.5mM 아스코르빅산 재고 용액의 필요한 부피를 혼합물에 추가하고 잠시 버블링합니다.
7. 비활성 가스를 30초 동안 뿜어내어 용액을 디가스합니다. 질화물, 아르곤, 헬륨을 사용할 수 있습니다.
8.필요한량의 10 mM 구리(II)-TBTA 재고 용액(55% DMSO)을 혼합물에 추가합니다. 비닐을 비활성 가스로 바이알을 세정하고 뚜껑을 닫습니다.
9.혼합물을 철저히 버블링합니다. 아자이드의 중요한 결정이 관찰되면 비닐을 80°C에서 3분간 가열한 후 버블링합니다.
10.실온에서 밤새 보관합니다.
11.올리고핵산에 대해서는 에타농, DNA에 대해서는 에탄올을 사용하여 결합물입니다. 철저히 혼합하고 -20°C에서 20분간 놓아둡니다.
올리고핵산 결합물을 침전시키기 위해: 3% 리튬 과염소산이 아세톤에 4배가 넘는 부피를 혼합물에 추가합니다(혼합물의 부피가 크면 몇 개의 비닐로 나눠서 처리합니다). DNA 결합물을 침전시키기 위해: 혼합물에 아세트산 소금을 추가하여 최종 농도를 0.3M로 조절합니다; 에탄올의 2.5배 부피(또는 이소프로판올의 0.8배 부피)를 추가합니다.
1.10000 rpm의 속도로 10분간 원심 분리합니다.
2.초산염을 버리고 1mL 에타농으로 세척하고 원심 분리기 10000 rpm의 속도로 10분간 세척합니다.
3.초산액을 버리고 공액을 건조시키고 RP-HPLC나 PAGE를 통해 결합물을 정제합니다.
부록. 클릭 화학 표시와 결합을 위해 사용되는 시약의 재고 용액 준비.
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5 mM아스코르브산 용액 |
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제조 |
18mg의 아스코르빅산을 20mL의 증기 증수에 녹입니다. |
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보관 조건 |
아스코르빅산은 공기로 쉽게 산화됩니다. 이 용액은 하루 동안 안정적입니다. 신선하게 준비된 용액을 사용합니다. |
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10 mM Copper (II)-TBTA Stock in 55% DMSO |
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제조 |
50mg의 구리 (II) 황산 펜타하이드레이트를 10mL의 증기 증수에 녹입니다. 116mg의 TBTA 리간드를 11mL의 DMSO에 녹입니다. 두 가지 용액을 혼합합니다. |
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보관 조건 |
실온에서 보관합니다. 이 용액은 수 년 동안 안정적으로 보관할 수 있습니다. |
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2M트리에틸아민산 버퍼, pH 7.0 |
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제조 |
2.78 mL의 트리에틸아민을 1.14 mL의 에타노산과 혼합합니다. 물을 추가하여 총 부피를 10 mL로 하고 pH를 7.0으로 조절합니다. |
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보관 조건 |
실온에서 보관합니다. 이 용액은 수 년 동안 안정적으로 보관할 수 있습니다. |
제품 문서 (Product Documents)
화학적 특성 (Chemical Properties)
저장 용액은 -80°C 보관 시 6개월 이내, -20°C 보관 시 1개월 이내에 사용하십시오.
용해도를 높이려면 튜브를 37°C로 데운 뒤 적절한 시간 동안 초음파 처리하십시오.
계산 도구 (Calculators)몰 농도 / 희석 / 분자량 / 단위 변환 / 생체 내 제형 / 용해도
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