인용 문헌 (Citations)
5 publications이 제품을 사용한 연구자들의 논문제품 설명 (Description)
DMPO(5,5-디메틸-1-피롤린-N-옥사이드)는 냉각온도에서도 전자자기공명(ESR) 기술을 사용하여 생물학적 시스템의 산소 중심의 자유질자를 측정하는 데 사용할 수 있는 수용성 아지트로스산 스핀 트랩이다. 스핀 트랩은 자유질자와 반응하여 추가 연구가 가능한 안정적인 첨가물을 형성한다 [2]. DMPO는 수용성이 있고 빨리 지질 이중막을 침투하며 독성이 낮으며,체외 실험 및 체내 실험에서 사용할 수 있다 [3, 4].
체외 실험에서 RAW 264.7 매크로팽세포에 50 mM DMPO를 24시간 처리한 결과, 항염증활성이 나타났으며, 유도형 아지트산 산소화효소(iNOS)의 표현이 감소하였고 MAPK, Akt 및 IκBα의 인산화를 억제하고, NF-κB p65 이동을 감소시켰다[5].
체내 실험에서 복강내 주사로 10-100 mg/kg의 DMPO를 투여한 결과 폼멀린 유도된 고통증에 대한 진통 효과가 나타났다[6].
References:
[1] Wang P, Zweier J L. Measurement of nitric oxide and peroxynitrite generation in the postischemic heart: evidence for peroxynitrite-mediated reperfusion injury[J]. Journal of Biological Chemistry, 1996, 271(46): 29223-29230.
[2] Bačić G, Spasojević I, Šećerov B, et al. Spin-trapping of oxygen free radicals in chemical and biological systems: new traps, radicals and possibilities[J]. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 2008, 69(5): 1354-1366.
[3]West M B, Rokosh G, Obal D, et al. Cardiac myocyte–specific expression of inducible nitric oxide synthase protects against ischemia/reperfusion injury by preventing mitochondrial permeability transition[J]. Circulation, 2008, 118(19): 1970-1978.
[4]Qin X, Wu C, Niu D, et al. Peroxisome inspired hybrid enzyme nanogels for chemodynamic and photodynamic therapy[J]. Nature Communications, 2021, 12(1): 5243.
[5]Zhai Z, Gomez-Mejiba S E, Zhu H, et al. The spin trap 5, 5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response in RAW 264.7 cells[J]. Life sciences, 2012, 90(11-12): 432-439.
[6]Chung W S, Go Y G, Lee W H. Antinociceptive effect of intraperitoneally administered 5, 5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide on formalin induced nociception in rats[J]. Korean J Anesthesiol, 2008, 54(3).
실험 프로토콜 (Protocol)
이 계획은 가이드만 제공하며, 구체적인 요구 사항에 맞게 수정해 주세요.
용액 조제
(1) 작업 용액: 실험 버퍼에 DMPO를 녹여 최종 농도 1 M으로 만듭니다. 0.22μm 필터 필름으로 걸러줍니다.
참고: 실제 상황에 따라 최적의 작업 농도를 조정하거나 문헌을 참고하여 스스로 그레이든트 농도를 설정해 주세요. 작업 용액은 반드시 즉시 준비하고 사용해야 합니다.
2. DMPO를 사용한 체내 산소 자유질자의 탐지[1, 2] (문헌에서, 참고용)
(1) 펜토바바르비탈 나트륨 (5 mg)을 사용하여 복강내 마취를 유도합니다. 심장을 제거하고 상승 대동맥 캔늘에 연결하여 일정한 유속 (2 mL/min)으로 Krebs-Henseleit buffe를 주입합니다.
(2) 혈액 공급 중단 후, 100μM의 이에틸렌트리아민펜타에틸렌산 (DTPA)을 포함하는 버퍼에 DMPO를 녹여 최종 농도를 1 M로 만듭니다. 재주입 중에 즉시 심장에 가까운 측벽을 통해 100μL/min의 속도로 트랩을 주입합니다.
(3) 재주입 중에 지정된 시간 간격으로 정기적으로 배수액을 수집하여 5분 동안 재관류할 때까지 합니다. 샘플을 수집한 후 즉시 각각의 테이블을 액체질소에 냉동합니다.
(4) 스펙트로메터를 사용하여 DMPO에 의해 포착된 산소 자유질자의 신호를 탐지하고 기록합니다.
3. DMPO를 사용한 체외 히드록시 자유기 탐지[3] (문헌에서, 참고용)
(1) 1 mL 샘플에 다양한 농도의 Fe3O4 용액을 추가합니다. 각 샘플에 10 μL DMPO 작업 용액을 자유질 제거제로 추가합니다. 37°C에서 샘플을 6시간 동안 배양하여 반응이 완전히 이루어지도록 합니다. 1 mL PBS에 10 μL DMPO 작업 용액을 반응 용액의 대조군으로 추가합니다.
(2) 0.22 µm 필터를 사용하여 반응 혼합물을 걸러 겉질 및 큰 입자를 제거합니다.
(3) 스펙트로메터를 사용하여 DMPO에 의해 포착된 히드록시 자유질자의 신호를 탐지하고 기록합니다.
참고: 이 프로토콜은 DMPO를 사용하여 체내 및 체외에서 산소 중심의 자유질자를 탐지하기 위한 가이드를 제공합니다. 다른 문헌 및 구체적인 실험 요구 사항에 따라 조정할 수 있습니다.
참고문헌:
[1]West M B, Rokosh G, Obal D, et al. Cardiac myocyte–specific expression of inducible nitric oxide synthase protects against ischemia/reperfusion injury by preventing mitochondrial permeability transition[J]. Circulation, 2008, 118(19): 1970-1978.
[2]Wang P, Chen H, Qin H, et al. Overexpression of human copper, zinc-superoxide dismutase (SOD1) prevents postischemic injury[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1998, 95(8): 4556-4560.
[3]Qin X, Wu C, Niu D, et al. Peroxisome inspired hybrid enzyme nanogels for chemodynamic and photodynamic therapy[J]. Nature Communications, 2021, 12(1): 5243.
제품 문서 (Product Documents)
화학적 특성 (Chemical Properties)
저장 용액은 -80°C 보관 시 6개월 이내, -20°C 보관 시 1개월 이내에 사용하십시오.
용해도를 높이려면 튜브를 37°C로 데운 뒤 적절한 시간 동안 초음파 처리하십시오.
계산 도구 (Calculators)몰 농도 / 희석 / 분자량 / 단위 변환 / 생체 내 제형 / 용해도
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