FLAG tag Peptide (Synonyms: H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH) |
| Catalog No.GP10150 |
FLAG tag Peptide는 장 소화효소 제한 사이트를 포함하는 8-peptide이다 (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
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Cas No.: 98849-88-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
FLAG tag Peptide는 장 소화효소 제한 사이트를 포함하는 8-peptide이다 (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
FLAG Tag peptide 융합 시스템은 단백질 식별 및 정화를 위한 면역 친화 크로마토그래피에 사용된다. FLAG Tag peptide 레이블 peptide는 비변성 조건에서의 엽입을 허용한다. FLAG Tag peptide는 주어진 융합 단백질의 N- 또는 C-terminus 융합될 수 있다.
FLAG tag Peptide마커 Peptide 융합 시스템은 단백질 식별 및 정화를 위한 독특하고 널리 사용되는 기술을 포함한다. 고체 지원물에 공유하게 결합되면, anti-Flag M1 항체를 사용하여 FLAG tag Peptide융합 단백질의 신속한 정화를 할 수 있으며, 이는 완화된 칼슘 종속 친화 크로마토그래피 절차이다. FLAG tag Peptide융합 단백질은 일반적으로 거친 세포 균류 또는 상청에서 시작하여 단일 단계에서 동질성으로 정화되며, 단백질을 생리적 소금수 (pH 7.2, 칼슘 또는 EDTA 포함) 외의 조건에 노출시키지 않은다. 전체 정화 과정은 몇 시간 내에 완료될 수 있다.
N-terminal FLAG tag Peptide 융합 단백질은 agarose affinity gel을 통하여 정제될 수 있다. 기계적 세포 파괴와 anti-Flag M1 항체를 자석 유리 구슬에 고정시켜 친화 정제를 결합한 단축 단백질 정제 절차이다. 수정된 유리 구슬은 효모 세포에 추가되어 연구실의 버텍스 믹서기에 혼합된다. 자석 유리 구슬은 대상 단백질을 포착하는 동안 효모 세포는 파괴된다. 고정된 자석에 접촉함으로써, 자석 유리 구슬은 효모 세포 잔해물에서 매우 효율적으로 분리될 수 있다. EDTA와 같은 엽합제는 자석 magnetic glass beads부터 FLAG tag Peptide 융합 단백질을 엽입시킬 수 있다.
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
| 플래그 펩타이드와 결합된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO) 풀다운에 의한 특정 세포 RNA로 구성된 리보뉴클레오단백질 (RNP) 복합체의 정제 [1]: | |
제조 방법 | 1. 냉장고에서 뼈 뗀 20 μM의 50 μL 올리고노데사이드와 1 M NaIO4의 냉각 50 μL을 섞습니다. 2. 얼음 위에서 10분 동안 인큐베이션합니다. 3. 냉각된 2% LiClO4/아세톤 1 mL을 추가하고 버텍스합니다. 4. 얼음 위에서 10분 동안 인큐베이션합니다. 5. 4℃에서 20000 g로 10분간 촘추합니다. 6. 윗물을 세심하게 흡인하고 냉각된 아세톤 1 mL을 추가합니다. 7. 4℃에서 20,000 g로 5분간 촘추합니다. 8. 촘추하는 동안 FLAG-hydrazide 용액을 준비합니다. 9. 윗물을 세심하게 흡인합니다. 10. 침전된 올리고노데사이드를 0.1 M 소다산 나트륨(pH 5.2) 12 μL에 녹입니다. 11. FLAG-peptide-hydrazide 용액 30 mM 12 μL을 추가합니다. 12. 실내온도에서 30분 동안 인큐베이션합니다. 13. 1 M NaCNBH3 10 μL을 추가합니다. 14. 실내온도에서 30분 동안 인큐베이션합니다. 15. 초순수물 60 μL과 3 M 소다산 나트륨(pH 5.2) 10 μL을 추가한 후 버텍스합니다. 16. 100% 에틸알코올 250 μL을 추가하고 버텍스합니다. 17. -80℃에서 30분 동안 인큐베이션합니다. 18. 15,000 g로 10분간 촘추합니다. 19. 윗물을 세심하게 흡인하고 80% 에틸알코올 1 mL을 추가합니다. 20. 15,000 g로 5분간 촘추합니다. 21. 윗물을 세심하게 흡인하고 세척 단계를 반복합니다. 22. 침전된 올리고노데사이드를 물 50 μL에 녹입니다. 23. 원래 올리고노데사이드 용액의 흡광도와 비교하여 260 nm에서 흡광도를 측정하여 FLAG-peptide-결합-올리고노데사이드의 농도를 추정합니다. |
참고문헌: [1]. Adachi S, Natsume T. Purification of noncoding RNA and bound proteins using FLAG peptide-conjugated antisense-oligonucleotides. Methods Mol Biol. 2015;1262:265-74. doi: 10.1007/978-1-4939-2253-6_16. PMID: 25555587. | |
| Cas No. | 98849-88-8 | SDF | |
| Synonyms | H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH | ||
| Chemical Name | FLAG Peptide | ||
| Canonical SMILES | C1=CC(=CC=C1CC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O)NC(=O)C(CC(=O)O)N)O | ||
| Formula | C41H60N10O20 | M.Wt | 1012.97 |
| Solubility | ≥50.6 mg/mL in DMSO, ≥210.6 mg/mL in Water, ≥34.03 mg/mL in EtOH | Storage | Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.9872 mL | 4.936 mL | 9.872 mL |
| 5 mM | 0.1974 mL | 0.9872 mL | 1.9744 mL |
| 10 mM | 0.0987 mL | 0.4936 mL | 0.9872 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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