인용 문헌 (Citations)
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D-Lin-MC3-DMA는 siRNA 전달에 사용되는 양이온성 지질이다. D-Lin-MC3-DMA는 생리학적 pH에서 거의 전기적으로 중성을 유지해서 독성을 감소시킨다. D-Lin-MC3-DMA는 산성 엔도솜 환경에서 양성자화되고 막 융합과 엔도솜 탈출을 촉진한다. D-Lin-MC3-DMA는 siRNA를 효율적으로 전달할 수 있다. D-Lin-MC3-DMA는 핵심 지질 성분으로 작용해서 DSPC, 콜레스테롤 및 PEG-DMG와 50:10:38.5:1.5의 몰비로 지질 나노입자를 형성한다. 이러한 지질 나노입자는 유전성 트랜스티레틴 매개 아밀로이드증의 치료에 사용된다[1-4].
실험 프로토콜 (Protocol)
D-Lin-MC3-DMA siRNA 포장 실험 절차 [1]
(1) 시약 준비: D-Lin-MC3-DMA, 1,2-디스테아로일-스네-글리세롤-3-포스포치로린, 콜레스테롤 및 PEG-DMG (몰비=50:10:38.5:1.5)를 에탄올에 용해하고 유기상으로 합니다. 최종 지질 농도는 15μM입니다. siRNA를 50mM 구연산염 완충액(pH=4)에 용해해서 수상으로 합니다.
(2) 지질 나노입자(LNP) 제조: D-Lin-MC3-DMA를 함유한 에탄올 용액(유기상)과 siRNA를 함유한 구연산염 완충액(수상)을 각각 두 개의 주사기에 담습니다. 주사기를 미세유체 칩의 입구에 연결합니다. 유속비는 3:1로 설정해서 총 유속은 12mL/min입니다. siRNA와 D-Lin-MC3-DMA의 비율은 양이온성 지질 1μmol당 siRNA 21μg입니다. 양이온성 지질 구성은 총 지질의 50mol%를 차지합니다. 형광 표시가 필요한 경우에 0.1mol%의 친지질성 염료 DiI(DiIC18(3)) (카탈로그 번호: GC33425)를 첨가할 수 있습니다.
(3) 정화 및 항체 결합: LNP 제조한 후 LNP를 즉시 4°C에서 HN 완충액 (10mM HEPES, 135mM NaCl, pH=6.9)에 대해 밤새 투석해서 에탄올을 제거합니다. 항체 표적 LNP의 경우에 항체를 LNP 표면의 말레이미드 기에 결합시킵니다. 결합된 LNP는 초고속 원심분리에 의해 정화한 후HN 완충액 (pH=7.4)에 대해 투석합니다.
주의 사항:
(1) 모든 LNP 제형의 입자 크기 범위는 59-139nm이고 다분산 지수는 ≤ 0.34입니다.
(2) LNP는 4°C에서 3주 동안 저장 후에도 siRNA의 무결성을 유지할 수 있습니다.
(3) 안전과 건강을 위해 작업 중 실험복과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
제품 문서 (Product Documents)
화학적 특성 (Chemical Properties)
계산 도구 (Calculators)몰 농도 / 희석 / 분자량 / 단위 변환 / 생체 내 제형 / 용해도
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