Polyethylenimine linear (MW:10000)

이 계획은 단지 안내를 제공합니다. 구체적인 필요에 맞게 수정해주세요.

1.용액 준비

(1) 저장 용액 준비: 냉동 보관된 고체를 실온으로 밸런스시키고 Polyethylenimine linear (PEI)을 녹이고 농도가 1 mg/mL인 저장 용액을 준비합니다.

참고: 사용하지 않은 저장 용액은 반복되는 냉동과 해동을 피하기 위해 어두운 곳에 -20°C나 -80°C에서 나눠 저장해야 합니다.

(2) 작업 용액 준비: 정식 실험 전에 저장 용액을 멸균된 물(또는 세럼이 없는 매체)로 희석 일하고 필요 한 농도 예를 들면: 250 μg/mL.

참고: 실제 상황에 따라 최적 작업 농도를 조정하거나 문헌을 참고하여 스스로 탐색할 구배 농도를 설정하여 탐색하기 바랍니다. 작업 유체는 반드시 준비한 후 즉시 사용되어야 합니다.

2. Polyethylenimine linear을 사용하여 293T 세포에 일시적으로 전환을 진행하는 방법[1]（문헌에서 참고）

(1）세포 재배：형질전환 하루 전에 지수 성장기의 293T 세포를 직경 6cm의 배양 접시에 재배해 둡니다. 세포 성장이 50-70%에 이를 정도를 보장해야 합니다.

(2）배양액 변경：세포 배양액을 제거하고 무혈청 배양액으로 교체합니다.

(3) DNA-PEI 복합물 준비: DNA 용액 240 μL (32 μg/mL)을 준비합니다.멸균된 PEI 용액 180μL (250 µg/mL)을 추가합니다. 약간의 버블록스를 사용하여 혼합하고 실온에서 30분 동안 재배합니다.

(4) DNA-PEI 복합물 추가: 복합물을 한 방울씩 세포에 추가하고 5% CO2 보유 박스에서 6시간 동안 재배합니다.

(5) 배양액 교체: 6시간 후 DNA-PEI 복합물이 포함된 배양액을 태아 소축청(FBS)이 추가된 DMEM 배양액으로 교체합니다.

(6) 배양과 유전자 표현: CO2 보유 박스에서 추가로 48시간 동안 배양한 후 유전자 표현을 분석합니다.

참고: 이 실험 프로토콜은 Polyethylenimine linear을 사용하여 세포 전달 실험에서의 참고용입니다. 실험 필요에 따라 구체적인 단계를 수정해주세요. 전달 효율과 세포 독성을 평가하기 위해 미처리된 세포와 알려진 유효한 전달제를 사용하는 세포 등 필요한 대조실험을 실시해주세요.

참조 문헌:

[1] Wang W , Zheng Q , Yu C ,et al.WSV056 Inhibits Shrimp Nitric Oxide Synthase Activity by Downregulating[J].Frontiers in microbiology, 2021, 12:796049.