인용 문헌 (Citations)
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Thiazole Orange는 핵산 형광 염료 계열에 속하는 비대칭 시아닌 염료이다. Thiazole Orange는 핵산, 특히 RNA와 결합할 때 현저한 형광 증강 효과를 나타내고 이러한 특성은 Thiazole Orange를 생물 분자 검출에 일반적으로 적용할 수 있게 한다. Thiazole Orange는 살아있는 세포의 막을 침투할 수 있고 핵산 결합할 때 높은 양자 수율을 보인다. Thiazole Orange의 최대 여기 파장(λex)은 약 510nm(488nm 및 470nm에서도 강한 여기가 있음)이고 최대 방출 파장(λem)은 약 527nm이다[2].
References:
[1] O'Neil CS, Beach JL, Gruber TD. Thiazole orange as an everyday replacement for ethidium bromide and costly DNA dyes for electrophoresis. Electrophoresis. 2018 Jun;39(12):1474-1477.
[2] Lee LG, Chen CH, Chiu LA. Thiazole orange: a new dye for reticulocyte analysis. Cytometry. 1986 Nov;7(6):508-17.
실험 프로토콜 (Protocol)
Thiazole Orange를 사용한 망상적혈구 계수
이 프로토콜은 연구 데이터에서 개조해서 참고용으로만 제공됩니다. 특정 실험 요구사항에 따라 조정이 필요할 수 있습니다.
(1) 시약 준비: Thiazole Orange를 메탄올에 용해해서 농도 1mg/mL의 원액을 준비합니다. 2mM EDTA와 0.02% 아질산 나트륨이 포함된 인산염 완충액(PBS)으로 Thiazole Orange 원액을 희석합니다. 권장 작업 농도는 0.3μM입니다. 희석된 염료 용액은 실온에서 빛을 차단한 상태에서 최소 1주일 동안 안정적으로 저장할 수 있습니다.
(2) 시료 준비: EDTA로 항응고된 전혈 시료을 사용합니다. 전혈 시료 5μL를 취해서 1mL의 희석된 Thiazole Orange 작업 용액에 첨가합니다. 실온에서 빛을 차단한 상태에서 1시간 배양합니다.
(3) 유세포 분석기 분석: 488nm 아르곤 이온 레이저가 장착된 유세포 분석기를 사용해서 분석합니다. 녹색 형광을 검출하기 위해 표준 FITC 필터 구성(예: 530/30nm 대역통과 필터)을 설정합니다. 분석 속도를 초당 500-1000개 세포로 설정하고 시료당 최소 10,000개의 세포를 수집합니다. 유세포 분석기 소프트웨어는 설정된 임계값보다 형광 강도가 높은 세포의 백분율을 자동으로 계산하고 망상적혈구 백분율에 해당합니다.
주의사항:
(1) 배양 시간은 30분에서 90분 사이에서 결과 정확성에 미치는 영향이 최소이고 1시간을 선택하는 것이 가장 편리합니다.
(2) 안전과 건강을 위해 작업 중 실험가운과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
References:
[1] Lee LG, Chen CH, Chiu LA. Thiazole orange: a new dye for reticulocyte analysis. Cytometry. 1986 Nov;7(6):508-17.
제품 문서 (Product Documents)
화학적 특성 (Chemical Properties)
저장 용액은 -80°C 보관 시 6개월 이내, -20°C 보관 시 1개월 이내에 사용하십시오.
용해도를 높이려면 튜브를 37°C로 데운 뒤 적절한 시간 동안 초음파 처리하십시오.
계산 도구 (Calculators)몰 농도 / 희석 / 분자량 / 단위 변환 / 생체 내 제형 / 용해도
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