DDAO |
Catalog No.GC61840
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DDAO는 조절 가능한 흥분 파장(600-650 nm)과 긴 방출 파장(λem=656 nm)을 가진 근적외선(NIR) 적색 형광 탐침이고 비교적 낮은 pKa(~5)를 가지고 있다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 118290-05-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DDAO는 조절 가능한 흥분 파장(600-650 nm)과 긴 방출 파장(λem=656 nm)을 가진 근적외선(NIR) 적색 형광 탐침이고 비교적 낮은 pKa(~5)를 가지고 있다. DDAO는 β-갈락토시다아제, 유산에스테라제, 단백질 인산 가수분해효소 2A, 카르복실라제 2, 인간 알부민, 에스테라제 등 다양한 효소의 활성을 검출하는데 사용할 수 있다. 단백질 인산효소 2A (PP-2A) 농도와 DDAO 유도 형광 사이에는 선형 관계가 있다[2]. DDAO는 대식세포가 암세포를 흡수하는 것을 연구하는데 사용할 수 있다[3]. DDAO는 B 세포의 증식을 연구하는데 사용할 수 있다[4].
References:
[1] Hou J, Qian M, Zhao H, et al. A near-infrared ratiometric/turn-on fluorescent probe for in vivo imaging of hydrogen peroxide in a murine model of acute inflammation[J]. Analytica Chimica Acta, 2018, 1024: 169-176.
[2] Leira F, Vieites J M, Vieytes M R, et al. Characterization of 9H-(1, 3-dichlor-9, 9-dimethylacridin-2-ona-7-yl)-phosphate (DDAO) as substrate of PP-2A in a fluorimetric microplate assay for diarrhetic shellfish toxins (DSP)[J]. Toxicon, 2000, 38(12): 1833-1844.
[3] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[4] Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B‐cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
이 계획은 단지 가이드를 제공하고 특정 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.
1.용액 준비
(1) 원액: DDAO를 DMSO에 녹여 5 mM 농도의 원액을 준비합니다.
노트: 사용되지 않은 원액을 분할하고 -20°C 또는 -80°C의 어두운 곳에서 보관합니다. 반복적인 동결과 해동을 피하도록 합니다.
(2) 작업 용액: 공식 실험 전에 적절한 버퍼(예: 무혈청 배지 또는 PBS)로 원액을 필요한 작업 농도로 희석합니다. 예를 들어 1μM 등입니다.
노트: 실제 상황에 따라 최적의 작업 농도를 조정하거나 문헌을 참고하고 농도 계단을 직접 설정합니다. 작업 용액은 즉시 준비하고 사용해야 합니다.
2. DDAO를 사용하고 대식세포가 암세포를 흡수하는 효과를 연구합니다[1](문헌에서 가져온 것으로 참고용만 합니다)
(1) 6웰 판에 0.8×10⁶ RAW264.5 세포나 1×10⁶ THP1 세포를 심었습니다.
(2) 24시간 배양 후 RAW264.7 세포는 0.1μg/mL 지질 다당류(LPS)로 24시간 처리하여 활성화되었습니다. THP1 세포는 40 nM phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)로 48시간 처리하고 분화되었습니다.
(3) 활성화된 대식세포는 배양액에서 최종 농도 40 nM의 DiO(제품 번호: GC19515)로 20분간 염색하고 배양액으로 세 번 헹구었습니다.
(4) 암세포는 37°C에서 15분 동안 1μM DDAO(5 mM 원액, DMSO, -20°C 보관)로 PBS에서 표지하고 1% FBS를 포함하는 PBS로 세척했습니다.
(5) DDAO로 표지된 대상 세포(1×10⁶)를 DiO로 염색된 대식세포(Mφ)에 추가하고 최종 부피 2 mL로 37°C에서 2시간 동안 배양했습니다.
(6) 배양 후 Mφ와 대상 세포는 EDTA-PBS로 세 번 세척하고 수확하고0.25% 트립신으로 소화했습니다.
(7) 유세포분석기를 사용하고 이중 표지된 세포(DiO⁺/DDAO⁺)를 평가했는데 성숙한 Mφ에 의해 흡수된 암세포를 나타냅니다.
3. DDAO를 사용하고 B 세포의 증식을 연구합니다[2](문헌에서 가져온 것으로 참고용만 합니다).
(1) B 세포를 1μM DDAO로 표지하고 4μg/mL CD40L, 100ng/mL BAFF, 1μg/mL 항IgM 또는 2.5μg/mL CpG가 첨가된 완전 RPMI 배지에서 배양합니다.
(2) 3일간 배양한 후 DDAO 희석(그리고 CRISPR 타겟 B 세포에서의 mCherry 발현)을 유세포분석기로 측정합니다.
참고 문헌:
[1] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[2]Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B?cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
| Cas No. | 118290-05-4 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1C(Cl)=C2C(C)(C)C3=C(C=CC(O)=C3)N=C2C=C1Cl | ||
| Formula | C15H11Cl2NO2 | M.Wt | 308.16 |
| Solubility | DMSO : 10.42 mg/mL (33.81 mM) | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2451 mL | 16.2253 mL | 32.4507 mL |
| 5 mM | 649 μL | 3.2451 mL | 6.4901 mL |
| 10 mM | 324.5 μL | 1.6225 mL | 3.2451 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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