Carvacrol

세포 라인

제조 방법

MCF-7 세포는 10% FBS가 함유된 DMEM, 1% 100U/mL 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신이 포함된 T-25 플라스크에서 배양되었고 37℃、5% CO₂、95% 습도의 베양기에서 유지되었습니다. 배지는 주 2회 완전 배지로 정기적으로 교환되었습니다. 융합에 도달한 후 세포는 트립신-EDTA 용액으로 트립신화되었습니다. 96웰 미세기공판에 웰당 1×10⁴개의 MCF-7 세포를 24시간 동안 접종하였습니다. 70% 융합도에 도달하면 세포는 37℃에서 불완전 배지로 1시간 동안 기아 처리되었습니다. 기아 기간 후 세포는 다양한 농도의 Carvacrol(0、25、50、75、100、125、150、175、200、225、250µM)으로 24시간 및 48시간 동안 처리되었습니다. 처리 후 MTT 분석을 사용해서 세포 생존율을 검출하였습니다. 세포 주기는 FACS로 분석되었습니다. 세포 사멸 검출에는 Annexin V-FITC/PI 방법이 사용되었습니다.

반응 조건

응용 분야

Carvacrol로 MCF-7 유방암 세포를 처리하면 세포 생존율을 현저하게 감소시키고G0/G1단계에서 세포 주기 정지를 유도해서 세포 사멸을 촉진합니다.

동물 모형

제조 방법

체중 200~300g인 43마리의 생체 암컷 Sprague-Dawley 쥐는 온도(25±2°C)、습도(50±5%) 및 12시간 광/암 주기가 조절된 방의 폴리카보네이트 케이지에 사육되었습니다. 동물들은 자유롭게 먹이와 물에 접근할 수 있었고 연구 전 1주일 동안 현지 환경에 적응할 수 있도록 하였습니다. 사료와 물은 자유롭게 제공되었습니다. 쥐는 체중에 따라 6개 그룹으로 나누었습니다. 건강 대조 그룹(n=7): 이 그룹의 쥐는 실험 기간(7일) 동안 자유롭게 먹이와 물에 접근할 수 있었습니다. 대조 용매그룹(n=7): 이 그룹은 6일 동안 경위관 게이지로 5% DMSO를 투여하였습니다. 7일째에 0.9% 생리식염수를 복강 내(i.p.)로 주사하였습니다. Carvacrol I그룹(n=6): 이 그룹은 6일 동안 5% DMSO에 녹인 20mg/kg Carvacrol을 투여하였고7일째에 1mg/kg LPS를 복강 내로 주사하였습니다. Carvacrol II군(n=8): 이 그룹은 Carvacrol I그룹과 동일한 과정에 따라 40mg/kg Carvacrol+1mg/kg LPS를 투여하였습니다.Carvacrol III그룹(n=7): Carvacrol I그룹 및 II그룹과 동일한 과정에 따라 이 그룹에 80mg/kg Carvacrol+1mg/kg LPS를 투여하였습니다. 패혈증 그룹(LPS; n=8): 체중에 따라 대장균 LPS의 아치사량을 1mg/kg으로 쥐에게 복강 내 투여하였고 쥐는 마취 후 지정된 시간에 안락사되었습니다. 모든 시험 용액은 오전 9:00에 경구(경위관 게이지)로 1일 1회, 6일 동안 투여되었습니다. Carvacrol그룹과 패혈증그룹은 7일째에 LPS로 처리되었습니다. LPS 처리 후 24시간에 모든 그룹의 동물은 케타민/자일라진 혼합물을 사용한 마취 하에 방혈로 희생되었습니다. 혈청 시료는 혈액 시료를 2,000×g에서 10분 동안 원심분리해서 얻었습니다. 모든 시료는 사용 전까지 -80°C에 보관되었습니다. TNF-α 및 IL-6 분석에는 두 가지 효소결합면역흡착분석 키트를 사용하였습니다. 말론디알데히드(MDA)는 티오바르비투르산 분석을 사용해서 정량적으로 검출되었습니다. 산화질소(NO)는 그리스 시약을 사용해서 아질산염으로 측정되었습니다.

제형

응용 분야

Carvacrol은 LPS로 유도된 대뇨 패혈증 모델에서 용량 의존적으로 염증성 사이토카인 TNF-α와 IL-6, 말론디알데히드(MDA) 및 산화질소(NO) 수치를 현저하게 감소시켰습니다.

References:
[1] Mari A, Mani G, Nagabhishek SN, et al. Carvacrol Promotes Cell Cycle Arrest and Apoptosis through PI3K/AKT Signaling Pathway in MCF-7 Breast Cancer Cells. Chin J Integr Med. 2021;27(9):680-687.
[2] Kara M, Uslu S, Demirci F, Temel HE, Baydemir C. Supplemental carvacrol can reduce the severity of inflammation by influencing the production of mediators of inflammation. Inflammation. 2015;38(3):1020-1027.