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Ionomycin calcium salt ist ein Schmalspektrum-Antibiotikum mit Wirkung gegen grampositive Bakterien, die vom Bakterium Streptomyces conglobatus produziert werden[1]. Ionomycin calcium salt fördert die Apoptose. Ionomycin induziert auch die Aktivierung der Proteinkinase C (PKC)[2].
In vitro führt die Behandlung mit 2 µM Ionomycin in LCLC 103H-Zellen zu einem sofortigen Anstieg der intrazellulären Ca2+-Konzentration von 50 auf 180 nM. In Ionomycin-behandelten Kulturen kommt es zu einer deutlichen DNA-Fragmentierung und PARP-Spaltung in ein 85-kDa-Fragment. Nekrose konnte in etwa 1-5% der mit Ionomycin behandelten Zellen nachgewiesen werden[2]. In ras-Onkogen-exprimierenden Zellen führt Ionomycin zu einer dosisabhängigen Erhöhung der intrazellulären Calcium-Aktivität. Bei 100 nmol/l Ionomycin steigt der intrazelluläre Calcium-Spiegel von 114 ± 17 nmol/l auf 342 ± 24 nmol/l an, ein Wert, der im Bereich der intrazellulären Calcium-Konzentration nach Bradykinin-Gabe liegt[3].
Im In-vivo-Wirksamkeitstest wurde die Ubiquitinierung von ENaC-β in Zellen, die Wildtyp-Nedd4-2a überexprimieren, durch 1 µm Ionomycin über 6 Stunden deutlich erhöht[4].
References:
[1] Liu WC, et al. Ionomycin, a new polyether antibiotic. J Antibiot (Tokyo). 1978 Sep;31(9):815-9.
[2] Chatila T, et al. Mechanisms of T cell activation by the calcium ionophore ionomycin. J Immunol. 1989 Aug 15;143(4):1283-9.
[3] WÖll E, et al. The role of calcium in cell shrinkage and intracellular alkalinization by bradykinin in Ha-ras oncogene expressing cells. FEBS Lett. 1993 May 17;322(3):261-5.
[4] Wang J, et al. Calcium activates Nedd4 E3 ubiquitin ligases by releasing the C2 domain-mediated auto-inhibition. J Biol Chem. 2010 Apr 16;285(16):12279-88.
Protokoll (Protocol)
| Zellexperiment [1]: | |
Zelllinien | N1E-115-Zellen |
Vorbereitungsmethode | Die Zellen wurden mit Ionomycin in verschiedenen Konzentrationen(0, 0.2, 0.5, 1, 2 und 10 µM) und mit unterschiedlichen Inkubationszeiten(3, 6, 12 und 24 Stunden) behandelt und das Zellüberleben mithilfe des Trypanblau-Farbstoff-Ausschlusstests bestimmt. |
Reaktionsbedingungen | 0, 0.2, 0.5, 1, 2 und 10 µM;3, 6, 12 und 24 Stunden |
Anwendungen | Die Behandlung mit Ionomycin führte konzentrations- und zeitabhängig zum Zelltod. |
| Tierversuch [2]: | |
Tiermodelle | Erwachsene männliche C57BL/6-Wildtyp-Mäuse(20-25 g, 8-10 Wochen alt) und FXR-KO-Mäuse(20-25 g, 8-10 Wochen alt) |
Vorbereitungsmethode | Um die biologische Funktion von FXR in vivo zu untersuchen, wurde Bayk8644 (2 mg/kg), ein L-Typ-Calcium-Kanalagonist, 10 Minuten nach der Reperfusion intraperitoneal verabreicht. Die Bayk8644-Stammlösung(1 mmol/L in Dimethylsulfoxid, DMSO) wurde in 1× phosphatgepufferter Kochsalzlösung(PBS) mit einer DMSO-Endkonzentration von 4.6% verdünnt. Ebenso wurde PBS mit 4.6% DMSO intraperitoneal in die Schein-, Wildtyp- und FXR-Knockout-Vehikelgruppen als Kontrolle verabreicht. Vor der Sauerstoff- und Glukose-Entzugstherapie(OGD) wurde 18 Stunden lang eine Dosisspanne von Ionomycin (50 nmol/L), GW4064 (0, 1, 1.5, 3 und 6 µmol/L) oder Z-guggulsterone (Z-GS, 0, 2.5, 5 und 10 µmol/L) verabreicht. |
Dosierungsform | 50 nmol/L (4.6% DMSO); 18 Stunden; i.p. |
Anwendungen | Die TUNEL-Färbung zeigte, dass die Behandlung mit Z-GS die neuronale Apoptose reduzierte und die Zugabe von IM(Ionomycin) die apoptotischen Neuronen im Vergleich zur OGD-Gruppe erheblich erhöhte. Das deutet darauf hin, dass die Hemmug von HXR(Farnesoid-X-Rezeptor) die neuronale Apoptose durch Verringerung des Calcium-Einstroms nach OGD/R reduzieren kann. |
References: | |
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