2,6-Diaminopimelic acid |
Catalog No.GA20387
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2,6-Diaminopimelic acid es un ácido dicarboxílico simétrico α, α′-diamino,que se encuentra en bacterias y plantas superiores.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 583-93-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2,6-Diaminopimelic acid es un ácido dicarboxílico simétrico α, α′-diamino,que se encuentra en bacterias y plantas superiores[1]. 2,6-Diaminopimelic acid es una precursor para la biosintesis de la L-lisina y un componente importante del peptidolicano bacteriano2]. 2,6-Diaminopimelic acid es una parte de las bacterias que cambia las bacterias (como germen bacteriano).Presencia o ausencia de 2,6-Diaminopimelic acid en la pared celular,clasificación de bacterias estafilocócicas (que contienen 2,6-Diaminopimelic acid) y bacterias estafilocócicas(que contienen ácido estafilolococoso) [3-4].
References:
[1]. Dzierzbicka K. Synthesis of 2, 6-diaminopimelic acid (DAP) and its analogues. Polish Journal of Chemistry. 2007; 81: 455-473.
[2]. Shaikh MS, Kale MA, Sharuk K. Discovery of Heterocyclic Analogs of Diaminopimelic Acid as Promising Antibacterial Agents Through Enzyme Targeted Inhibition of Lysine Biosynthesis. Current Enzyme Inhibition. 2018 Aug 1; 14(2): 120-130.
[3]. Masson HA, Denholm AM, Ling JR. In vivo metabolism of 2, 2'-diaminopimelic acid from gram-positive and gram-negative bacterial cells by ruminal microorganisms and ruminants and its use as a marker of bacterial biomass. Applied and environmental microbiology. 1991 Jun; 57(6): 1714-1720.
[4]. Bhamidi S, Shi L, Chatterjee D, et al. A bioanalytical method to determine the cell wall composition of Mycobacterium tuberculosis grown in vivo. Analytical biochemistry. 2012 Feb 1; 421(1): 240-249.
Este protocolo se utiliza para distiguir a los estafilococos que cotienen 2,6-Diaminopimelic acid (DAP) de los estafilococos que contienen ácido teicoico [1-2]. Solo se utiliza como guía experimental.La aplicación en sí debe modificarse según tus necesidades.
1. Preparación de reactivos y materiales
Cultivo puro de Staphylococcus spp. a analizar;Solución estándar de DAP(1mg/mL,disuelta en 0,1 M HCI);ácido teicoico estándar(o una cepa de control positivo conocida por contener ácido teicoico,como Staphylococcus aureus);6M ácido clorhídrico (HIC),ácido tricloroacético al 10%(TCA);solución colorimétrica de ninhidrina;Solución de tinción de ácido fosfomolíbdico.
2.Pasos experimentales
Extracción e hidrólisis de la pared celular bacteriana:
(1) Recogida bacteriana:
La cepa a analizar se inoculara en un medio líquido TSB y se cultivó a 37ºC durante 18-24 horas.Las bacterias se recogieron por centrifugación (8000rpm, 10min) y se lavaron 3 veces con PBS.Las células liofilizadas o directamente pasan al siguiente paso de hidrólisis.
(2) Hidrólisis ácida(liberación de DAP):
Toma 50 mg de las ce´lulas húmedas añade 1 mL de 6M HCI e hidróliza a 110ºC durante 16-18 horas-Tras el enfriamiento,centrifugar (12000 rpm,5 min),recoger el sobrenadante y filtrar con una membrana filtrante de 0.22μm.
(3) Tratamiento con TCA(extraer ácido estafilocócico):
Toma otros 50 mg de las células húmedas,añade 1 mL de TCA al 10% y hierve a 100ºC durante 30 minutos.Tras la centrifugación,toma el sobrenadante para usarlo más adelante.
Detección de cromatografía de capa delgada(TLC):
(1) Detección de DAP:
Manchado: Localiza el hidrilizato ácido y el estándar DAP en la placa TLC8capa G de gel de sílice).
Disolvente revelador:n-butanol:ácido acético glacial:agua¡4:1:1(v/v).
Revelación del color:rocía solución de ninhidrina,hornea a 110ºC durante 5 minutos y observa las manchas moradas(el valor Rf del DAP es de aproximadamente 0,3).
(2) Detección de ácido estafilocócico:
Manchado: El extracto de TCA y el control positivo se detectan en otra placa de TLC.
Disolvente revelador:cloroformo:metanol:agua=65:25:4(v/v).
Desarrollo del color:rociar solución de tinción de ácido fosfomilobdíco,hornear a 10ºC durante 10 minutos,las machas azules indican la presencia de grupos fosfato.
Sentencia dle resultado:
(1)Estafilococos que contienen DAP:Tras el desallorro del color TLC,la muestra de hidrólisis ácida es consistente con la posición estándar de la mancha del DAP (la ninhidrina muestra púrpura),y la prueba de ácido estafilocócico es negativa.
(2)Estafilococos que contiene ácido estafilocócico:el extracto de TCA muestra manchas azules (la tinción con ácido fosfomollíbdico es positiva),y la prueba DAP es negativa.
Precauciones:
(1)La hidrólisis ácida dl DAO requiere un estricto control de temperatura(110ºC±2℃) para evitar uan degradación excesiva.Al extraer ácido estafilocócico,un tratamiento con TCA durante demasiado tiempo puede destruir el grupo fosfato.
(2)Se recomienda combinar la tinción de Gram (para confirmar la morfología bacteriana)e identificación bioquímica(como la prueba de la catalasa )para ayudar en la diferenciación)
(3)Si la señal TLC es débil,sed puede usar HPLC o espectrometría de masas (LC-MS) para análisis cuantitativo.
(4)El ácido clorhídrico y el ácido tricloroacético son corrosivos,por lo que deben llevarse guantes y gafas durante la operación.
References:
[1]. Masson HA, Denholm AM, Ling JR. In vivo metabolism of 2, 2'-diaminopimelic acid from gram-positive and gram-negative bacterial cells by ruminal microorganisms and ruminants and its use as a marker of bacterial biomass. Applied and environmental microbiology. 1991 Jun; 57(6): 1714-1720.
[2]. Bhamidi S, Shi L, Chatterjee D, et al. A bioanalytical method to determine the cell wall composition of Mycobacterium tuberculosis grown in vivo. Analytical biochemistry. 2012 Feb 1; 421(1): 240-249.
| Cas No. | 583-93-7 | SDF | |
| Formula | C7H14N2O4 | M.Wt | 190.2 |
| Solubility | H2O : 10.42 mg/mL (54.78 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C) | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 5.2576 mL | 26.2881 mL | 52.5762 mL |
| 5 mM | 1.0515 mL | 5.2576 mL | 10.5152 mL |
| 10 mM | 525.8 μL | 2.6288 mL | 5.2576 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 18 reference(s) in Google Scholar.)