H-Gln-AMC |
Catalog No.GA22334
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H-Gln-AMC es un sustrato fluorogénico utilizado para medir la actividad de las enzimas glutamil ciclasa (QC) con un valor de Km de 51 ± 3µM a pH 8.0 y un valor de kcat de 5.4 ± 0.1s-1
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 105888-45-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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H-Gln-AMC es un sustrato fluorogénico utilizado para medir la actividad de las enzimas glutamil ciclasa (QC) con un valor de Km de 51 ± 3µM a pH 8.0 y un valor de kcat de 5.4 ± 0.1s-1[1]. La glutaminil ciclasa (QC) cataliza la ciclización intrmolecular de los residuos de glutaminilo N-terminal glutaminyl (Gln) y glutamyl (Glu) para formar péptidos o proteínas pyroglutamic (pGlu). Algunos hallazgos recientes sugieren que el control de calidad puede ser un objetivo potencial contra la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington y otras enfermedades neurodegenrativas graves[2].
H-Gln-AMC se utilizó como sustrato fluorescente para detectar la actividad de la glutaminil ciclasa (QC) en el líquido cerebrospinal (CSF) de pacientes con esclerosis múltiple (MS).En el CSF, H-Gln-AMC fue catalizado por QC para formar pyroglutamyl-AMC, que posteriormente fue hidrolizado por piroglutamil aminopeptidasa para liberar el producto fluorescente AMC. Los resultado muestraran un ligero aumento en la actividad de QC observado en pacientes con MS, aunque la diferencia no fue significativa[3]. H-Gln-AMC se utilizó como sustrato fluorescente para medir la actividad de las glutaminil ciclasas (QCs) de Porphyromonas gingivalis (PgQC), Tannerella forsythia (TfQC), y Prevotella intermedia (PiQC). A una concentración de 50μM H-Gln-AMC, la actividad catalítica de PgQC, TfQC y PiQC podría determinarse con precisión en función de los cambios en la intensidad de fluorescencia de AMC[4].
References:
[1] Schilling S, Hoffmann T, Rosche F, et al. Heterologous expression and characterization of human glutaminyl cyclase: evidence for a disulfide bond with importance for catalytic activity. Biochemistry. 2002 Sep 3;41(35):10849-57.
[2] Szaszkó M, Hajdú I, Flachner B, et al. Identification of potential glutaminyl cyclase inhibitors from lead-like libraries by in silico and in vitro fragment-based screening. Mol Divers. 2017.21:175–186
[3] Gontsarova A, Kaufmann E, Tumani H, et al. Glutaminyl cyclase activity is a characteristic feature of human cerebrospinal fluid. Clin Chim Acta. 2008 Mar;389(1-2):152-9.
[4] Taudte N, Linnert M, Rahfeld J, et al.Mammalian-like type II glutaminyl cyclases in Porphyromonas gingivalis and other oral pathogenic bacteria as targets for treatment of periodontitis. J Biol Chem. 2021 Jan-Jun:296:100263.
H-Gln-AMC utilizdo como sustrato para ensayos de actividad de control de calidad.
1. Prepare un tampón Tris-HCl de 50mM con NaCl de 150mM a pH 8.0.
2. Prepare soluciones de H-Gln-AMC con concentraciones variables (e.g 50µM para pruebas de actividad catalítica de control de calidad bacteriana) en el tampón Tris-HCl.
3. Agregue 0.5U de pyroglutaminyl aminopeptidase a cada pozo de una placa de microtiter de 96 pozos que contiene las soluciones H-Gln-AMC.
4. Incubar el plato a 30°C durante 10 minutos.
5. Agregue aproximadamente 50nM de la enzima QC a un volumen final de 125μL de mezcla de reacción para iniciar la reacción.
6. Monitoree la intensidad de fluorescencia a longitudes de onda de excitación/emisión de 380/460nm usando el FluoStar Optima
7. Calcule la actividad de control de calidad a partir de una curva estándar del fluoróforo AMC generado bajo las mismas condiciones de ensayo
Este protocolo solo proporciona una guía y debe modificarse de acuerdo con sus necesidades específicas.
References:
[1]Taudte N, Linnert M, Rahfeld J, et al.Mammalian-like type II glutaminyl cyclases in Porphyromonas gingivalis and other oral pathogenic bacteria as targets for treatment of periodontitis. J Biol Chem. 2021 Jan-Jun:296:100263.
| Cas No. | 105888-45-7 | SDF | |
| Formula | C15H17N3O4 | M.Wt | 303.32 |
| Solubility | Soluble in DMSO | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2968 mL | 16.4842 mL | 32.9685 mL |
| 5 mM | 659.4 μL | 3.2968 mL | 6.5937 mL |
| 10 mM | 329.7 μL | 1.6484 mL | 3.2968 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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