Cardiogreen (Foxgreen) (Synonyms: Cardio Green, Ujoviridin)

Protocolo para el ensayo de absorción de Cardiogreen (Foxgreen) en la célula:

Cardiogreen (Foxgreen, verde indocianina) es un tinte biológico no tóxico, solo puede ser recogido por hepatocitos después de la inyección intravenosa, después de lo cual es secretado por hepatocitos. Cuando se cultivan con un medio sin suero, los hepatocitos toman Cardiogreen, y el citoplasma aparece verde. Después de la restauración del suero, Cardiogreen se secreta del citoplasma.

1. Agregue Cardiogreen al medio hepatocito libre de suero con una concentración final de 1 mg/mL y las células se cultivan con el medio durante 1 hora a 37℃.

2. Retire el medio sin suero y lave las células con PBS tres veces.

3. Las células se examinan y se obtienen imágenes con un microscopio.

Protocolo para las imágenes de las vías urinarias en ratones por Cardiogreen liposomal ^[1]:

0-0.8 μM Cardiogreen se incubó con liposomas al 1% y pireno 20 μM o 200 μM para evaluar la polaridad y la fluidez, respectivamente. Los espectros de fluorescencia se medieron utilizando un espectrofotómetro de flurescencia a una longitud de onda de excitación de 335 nm.

1.Los ratones fueron afeitados bajo anestesia de isoflurano(1%-2%, v/v)y se sometieron a exploraciones de referencia utilizando un sistema de imágenes in vivo.

2.Doscientos microlitros de 8 mg/kg de fosfolipón 50 liposomas de Cardiogreen o el compuesto libre en tampón de sacarosa de 2 mM (tampón de fosfato pH 7, con 9.3% de sacarosa ) se inyectaron en la vena de cola y los ratones fueron escaneados repetidamente durante un período de tiempo de hasta 120 minutos.

3.Para los estudios ex vivo, los animales fueron tratados como se describió anteriormente y sacrificados bajo anestesia por dislocación cervical, 10 minutos después de la inyección.

4.Se recogió sangre cardiac en placas de 96 pocillos heparinizados y se extrajeron tejidos. A lo largo del procedimiento de recolección, las muestras de tejido y sangre se protegieron de la luz y se mantuvieron en hielo.

5.Inmediatamente después, la sangre y los tejidos fueron escaneados por una imagen biomolecular.

Protocolo para estudios de la acumulación de Cardiogreen liposomal liposomal en el sistema urinario:

1.Cardiogreen liposómico o libre (8 mg/kg). se inyectó en la vena de la cola, y 3 minutos después, los ratones fueron tratados con altas dosis de pentobarbital administrado por vía intraperitoneal.

2.El tiempo total de circulación activa después de la inyección de Cardiogreen fue de unos 10 minutos.

3.A partir de entonces, los ratones fueron sometidos a laparotomía de línea media con exposición completa del retroperitoneo.

4.Los uréteres se identificaron en su origen a partir de los riñones, y se cortaron distalmente o se ataron libremente para su identificación.

5.Los ratones también fueron histerectomizados para facilitar la identificación de la vejiga urinaria.

6.Posteriormente, los animales fueron escaneados por imágenes biomoleculares.

Este protocolo solo proporciona una guía, y debe modificarse de acuerdo con sus necesidades específicas.

References:

[1].Portnoy E, Nizri E, et,al. Imaging the urinary pathways in mice by liposomal indocyanine green. Nanomedicine. 2015 Jul;11(5):1057-64. doi: 10.1016/j.nano.2015.02.019. Epub 2015 Mar 16. PMID: 25791809.