D-Sorbitol-13C6 |
Catalog No.GC71652
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D-Sorbitol-13C6 est un sorbitol entièrement marqué au carbone-13 utilisé pour le traçage métabolique et l'analyse par spectrométrie de masse.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 121067-66-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
D-Sorbitol-13C6 est un sorbitol entièrement marqué au carbone-13 utilisé pour le traçage métabolique et l'analyse par spectrométrie de masse[1]. D-Sorbitol-13C6 est communément utilisé pour étudier le flux de carbone, les voies métaboliques et comme étalon interne analytique[2-3].
References:
[1]. Dash RP, Srinivas NR, Babu RJ. Use of sorbitol as pharmaceutical excipient in the present day formulations–issues and challenges for drug absorption and bioavailability. Drug development and industrial pharmacy. 2019 Sep 2; 45(9): 1421-1429.
[2]. Scherling C, Ulrich K, Ewald D, et al. A metabolic signature of the beneficial interaction of the endophyte Paenibacillus sp. isolate and in vitro–grown poplar plants revealed by metabolomics. Molecular Plant-Microbe Interactions. 2009 Aug; 22(8): 1032-1037.
[3]. Kiani‐Pouya A, Roessner U, Jayasinghe NS, et al. Epidermal bladder cells confer salinity stress tolerance in the halophyte quinoa and Atriplex species. Plant, Cell & Environment. 2017 Sep;40(9): 1900-1915.
Ce protocole décrit l'utilisation de D-Sorbitol-13C6 pour le traçage du flux métabolique de l'utilisation et du transport du sucre dans les ostéoclastes résorbants l'os. Les conditions d'application réelles peuvent nécessiter une optimisation en fonction du type de cellule et de la dose du traceur[1–2].
1.Préparation des Réactifs et Matériels
D-Sorbitol-13C6, des ostéoclastes matures dérivés de macrophages de la moelle murins (BMMs), M-CSF (30ng/mL), RANKL (50ng/mL), α-MEM sans glucose supplémenté avec 10% de FBS dialysé, LC-MS/MS avec des étalons internes appropriés.
2.Etapes Expérimentales
(1)Différenciation des Ostéoclastes
Isoler BMMs de rat et les différencier dans α-MEM avec M-CSF et RANKL pendant 5 jours jusqu'à ce que des ostéoclastes matures se forment (cellules multinucléées TRAP+ ). Passer à un milieu sans glucose 6-12 heures avant le marquage pour réduire la réserve de carbone non-marqué en arrière-plan.
(2)Traitement au Traceur
Préparer 1-5mM de D-Sorbitol-13C6 dans α-MEM sans glucose avec 10% de FBS dialysé. Ajouter le milieu traceur aux puits (500µL-1mL par puits) et incuber les cellules à 37°C, 5% de CO2 pendant 1-4 heures en fonction de la réssolution de flux requise.
(3)Extraction des Métabolites
Laver vite les cellules avec PBS froid. Arrêter le métabolisme en ajoutant du méthanol froid à 80% (pré-refroidi à -80°C). Râper les cellules et transférer le lysat vers des tubes à microcentrifuger. Centrifuger à 14000rpm, 4°C, pendant 10 minute. Recueillir le surnageant pour l'analyse LC-MS/MS.
(4)Analyse LC-MS/MS
Analyser les métabolites marqués en utilisant LC-MS/MS à triple quadripôle en mode ESI négatif. Suivre les transitions des sucres 13C-marqués et non-marqués (par exemple, glucose, fructose, sorbitol, G6P). Utiliser D-Sorbitol-13C6 comme étalon interne pour la normalisation lors de la quantification de D-sorbitol endogène. Normaliser en fonction de la teneur en protéines ou du nombre de cellules si nécessaire.
Remarques et Précautions
(1)Optimisation de la dose du traceur : des concentrations élevées de sorbitol peuvent affecter l'équilibre osmotique-effectuer une titration pour trouver une dose non-toxique.
(2)Conception du suivi temporel : Pour l'analyse dynamique de flux, collecter des échantillons à plusieurs points temporels (par exemple, 0, 1, 2, 4h).
(3)Chevaucher spectral de masse: S'assurer que les formes marquées et non-marquées peuvent être résolues au niveau de la ligne de base.
(4)Témoins : Inclure un témoin de D-sorbitol non-marqué et un blanc "sans traceur" pour la correction du fond.
(5)Imagerie en aval : la co-incubation avec LysoTracker ou LAMP2 peut aider à localiser les réserves de sucres marqués.
(6)Stockage : Conserver les échantillons à -80°C jusqu'à l'analyse pour prévenir la dégradation.
References:
[1]. Ribet A, Ng PY, Guo Q, et al. Sugar Transporter Slc37a2 Regulates Bone Metabolism Via a Dynamic Tubular Lysosomal Network in Osteoclasts. Journal of Bone and Mineral Research. 2023 Feb 1; 38: 72.
[2]. Wang L, Stanfill S, Valentin-Blasini L, et al. LC-MS/MS analysis of sugars, alditols, and humectants in smokeless tobacco products. Beitr Tab Int. 2019 Jun 13;28(5): 203-213.
| Cas No. | 121067-66-1 | SDF | |
| Formula | 13C6H14O6 | M.Wt | 188.13 |
| Solubility | H2O : 250 mg/mL (1328.87 mM; Need ultrasonic) | Storage | -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 5.3155 mL | 26.5774 mL | 53.1547 mL |
| 5 mM | 1.0631 mL | 5.3155 mL | 10.6309 mL |
| 10 mM | 531.5 μL | 2.6577 mL | 5.3155 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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