Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) |
Catalog No.GC35461
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Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) est un substrat à extinction de fluorescence (substrat FRET), utilisé à mesurer l'activité de la sortase bactérienne.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) est un substrat à extinction de fluorescence (substrat FRET), utilisé à mesurer l'activité de la sortase bactérienne. Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) contient une séquence de reconnaissance de la sortase (LPXTG), un groupe fluorescent Abz à l'extrémité N-terminale, et un groupe Quencher (bloqueur de fluorescence) DNP à l'extrémité C-terminale. On l'utilise couramment pour les tests d'activité de la sortase A (SrtA) et les expériences de criblage d'inhibiteurs. Quand la sortase A le clive, Abz se sépare DNP, et la fluorescence revient. On peut suivre le clivage du substrat à Ex/Em=320nm/420nm[1].
References:
[1] Zhang J, et al. Antiinfective therapy with a small molecule inhibitor of Staphylococcus aureus sortase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Sep 16;111(37):13517-22.
Test d'activité de la Sortase A [1-2]
Ce protocole est basé sur des données bibliographiques, tu peux l'adapter selon tes besoins spécifiques.
1.Préparation de la solution de substrat de travail
(1)Préparer la solution stock : Dissoudre Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) dans DMSO à une concentration de 10mM.
Note : Répartis la solution stock non-utilisée en aliquotes, conserve-la à l'abri de la lumière à -20°C ou -80°C pour éviter les congélations/décongélations répétées.
(2)Préparer la solution de travail : Diluer la solution stock avec le tampon de réaction (50mM Tris-HCl, 150mM NaCl; pH=7.5).
Note : Prépare la solution de travail juste avant utilisation, conserve-la brièvement à 4°C ou sur la glace.
2.Préparer une plaque à 96 puits, y compris :
Puits expérimentaux : Mélange du substrat Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) et Sortase A, aux concentrations respectives de 10µM et 5-15µM.
Puits blancs (échantillon) : Seulement le substrat Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) (10µM), compléter avec du tampon de réaction à atteindre le volume final.
Puits blancs (substrat) : Seulement Sortase A, à concentration de 5-15μM, compléter avec du tampon de réaction à atteindre le volume final.
3.Incuber la plaque à 96 puits à 37°C pendant 10-60 minutes, puis mesurer l'intensité de fluorescence à 420nm d'émission, avec une excitation à 320nm, à l'aide d'un lecteur de microplaques.
Précautions :
1) Le substrat fluorescent est sujet à l'extinction de fluorescence (Quenching). Evite autant que possible l'exposition à la lumière pour ralentir ce phénomène.
2)Pour ta sécurité, porte une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant la manipulation.
References:
[1] Gaspar AH, Marraffini LA, Glass EM, Debord KL, Ton-That H, Schneewind O. Bacillus anthracis sortase A (SrtA) anchors LPXTG motif-containing surface proteins to the cell wall envelope. J Bacteriol. 2005;187(13):4646-4655.
[2] Chen Y, Li W, Wang L, Wang B, Suo J. Novel inhibition of Staphylococcus aureus sortase A by plantamajoside: implications for controlling multidrug-resistant infections. Appl Environ Microbiol. 2025;91(1):e0180424.
| Cas No. | SDF | ||
| Formula | C43H58N11F3O16 | M.Wt | 1042.02 |
| Solubility | DMSO : 50 mg/mL (Need ultrasonic); H2O : < 0.1 mg/mL (insoluble) | Storage | Store at -80°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 959.7 μL | 4.7984 mL | 9.5967 mL |
| 5 mM | 191.9 μL | 959.7 μL | 1.9193 mL |
| 10 mM | 96 μL | 479.8 μL | 959.7 μL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 12 reference(s) in Google Scholar.)