AF488 NHS ester |
Catalog No.GC59158
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AF488 NHS ester est une sonde fluorescente spécifique des amines, avec une longueur d'onde d'excitation optimale de 488nm et une longueur d'onde d'émission de 525nm.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 1374019-99-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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AF488 NHS ester est une sonde fluorescente spécifique des amines, avec une longueur d'onde d'excitation optimale de 488nm et une longueur d'onde d'émission de 525nm[1]. AF488 NHS ester est sensible à pH et émet une fluorescence à des valeurs de pH faibles, ce qui peut être utilisé pour détecter l'entrée des nanoparticules dans les lysosomes à faible pH[2]. AF488 NHS ester peut être utilisé pour marquer les virus afin de suivre les interactions virus-cellules[3]. AF488 NHS ester peut également être utilisé pour préparer des anticorps contre Staphylococcus aureus (S. aureus), établissant ainsi une méthode de détection de S. aureus basée sur un test immunofluorescent adsorbant[4].
References:
[1] Kendall C G, Stockton A M, Leicht S, et al. Amine analysis using AlexaFluor 488 succinimidyl ester and capillary electrophoresis with laser‐induced fluorescence[J]. Journal of Analytical Methods in Chemistry, 2015, 2015(1): 368362.
[2] Vaughan H J, Est-Witte S, Dockery L T, et al. A high-throughput lysosome trafficking assay guides ligand selection and elucidates differences in CD22-targeted nanodelivery[J]. Science and Technology of Advanced Materials, 2024, 25(1): 2351791.
[3] Zhang S L X, Tan H C, Hanson B J, et al. A simple method for Alexa Fluor dye labelling of dengue virus[J]. Journal of virological methods, 2010, 167(2): 172-177.
[4] Kim J K, Yun H Y, Kim J S, et al. Development of fluorescence-linked immunosorbent assay for rapid detection of Staphylococcus aureus[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2024, 108(1): 2.
Méthode de détection à base de AF488 NHS ester
Ce protocole fournit seulement une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.
1.Préparation de la solution de coloration
(1)Préparation de la solution stock : Préparez une solution stock de AF488 NHS ester à une concentration de 1mM dans DMSO anhyde de haute qualité. Remarque : Aliquotez la solution stock non-utilisée et conservez-la à l'abri de la lumière à -20°C pour éviter les cycles de congélation et de décongélation répétés.
(2)Préparation de la solution de travail : Diluez la solution stock avec un tampon approprié (tel que PBS) pour préparer une solution de travail à une concentraiton de 1µM. Ajustez la concentration de la solution de travail selon la situation réelle et préparez-la immédiatement pour éviter les cycles de congélation et de décongélation répétés. Remarque : La solution de travail doit être préparée fraîchement le jour de l'expérience.
2.Préparation de la protéine
(1)Echangez la protéine dans un tampon à 0.1M de NaHCO3 (pH 8,3) à l'aide d'un filtre à centrifugation ou d'une colonne de désalting.
(2)Mesurez l'absorbance à 280nm et calculez la concentration, puis mélangez AF488 NHS ester et la protéine dans un rapport molaire de 3:1 (colorant : protéine) pour obtenir environ 0.8-1.0 molécule de colorant par protéine.
(3)Incubez 1h à température ambiante, à l'abri de la lumière et sous agitation douce.
3.Extinction et détection
(1)Ajoutez 10µL de Tris 1M pH 8,0 par 100µL de volume de réaction et incubez 15 minutes.
(2)Eliminez le colorant non-réagi par filtration sur gel ou désalting par centrifugation pré-équilibré avec PBS, puis effectuez la mesure par cytométrie en flux.
Précautions :
(1)Tous les colorants fluorescents présentent un problème d'extinction. Evitez la lumière autant que possible pour ralentir l'extinction de la fluorescence.
(2)Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.
(3)AF488 NHS ester doit être conservé à l'abri de la lumière tout au long de l'expérience.
(4)Maintenez pH de la réaction entre 8,0 et 8,5 : pH plus faible ralentit le couplage, tandis que pH plus élevé augmente l'hydrolyse.
(5)Ce protocole et tous les réactifs sont destinés à une utilisation exclusive en recherche scientifique.
References:
[1] Wang J, Bhattacharyya J, Mastria E, et al. A quantitative study of the intracellular fate of pH-responsive doxorubicin-polypeptide nanoparticles[J]. Journal of Controlled Release, 2017, 260: 100-110.
| Cas No. | 1374019-99-4 | SDF | |
| Formula | C31H32N4O13S2 | M.Wt | 732.74 |
| Solubility | good in water, DMF, DMSO | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.3647 mL | 6.8237 mL | 13.6474 mL |
| 5 mM | 272.9 μL | 1.3647 mL | 2.7295 mL |
| 10 mM | 136.5 μL | 682.4 μL | 1.3647 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 11 reference(s) in Google Scholar.)