N6-Methyl-dATP |
Catalog No.GB20075
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N6-Methyl-dATP, en tant que ribonucléoside triphosphate modifié à la base, peut agir en tant qu'agoniste efficace pour les récepteurs purinergiques P2Y chez les organismes comme le cobaye et le ténia.
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Cas No.: 5085-65-4(free acid)
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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N6-Methyl-dATP, en tant que ribonucléoside triphosphate modifié à la base, peut agir en tant qu'agoniste efficace pour les récepteurs purinergiques P2Y chez les organismes comme le cobaye et le ténia[1]. Il a également été démontré que N6-Methyl-dATP joue un rôle critique dans la carcinogenèse et la détermination du destin des cellules souches[2].
In vitro, lorsque les cellules HeLa sont traitées avec 4μM N6-Methyl-dATP pendant 45 minutes, N6-méthyladénine (N6-mA) doit d'abord être absorbée par les cellules et métabolisée en sa forme active, N6-Methyl-dATP, pour servir de substrat à DNA polymérase et être intégré dans DNA. Ce processus relève de la catégorie des produits de méthylation de RNA intervenant erronément dans la synthèse de DNA via la voie de sauvetage des nucléotides, et son mécanisme d'intégration repose sur la reconnaissance non-spécifique des nucléotides modifiés par DNA polymérase[3].
In vivo, la micro-injection de 0.3 mM N6-Methyl-dATP dans les poissons - zèbre homozygotes MTH1KO avec inactivation du gène mth1 révèle que N6-Methyl-dATP présent dans le pool de nucléotides peut être incorporé dans DNA, et ce processus peut être bloqué par la protéine MTH1[4]. Dans les mutants Arabidopsis MAPDA, un rapport élevé de N6-Methyl-dATP/ATP (1.49%) induit des défauts de croissance racinaire dus à une intégration erronée par RNA polymérase II ou une interférence avec le métabolisme énergétique[5].
References:
[1] He ML, Koshimizu TA, Tomić M, et al. Purinergic P2X(2) receptor desensitization depends on coupling between ectodomain and C-terminal domain. Mol Pharmacol 2002, 62(5):1187-1197.
[2] Pacini CE, Bradshaw CR, Garrett NJ, et al. Characteristics and homogeneity of N6-methylation in human genomes. Sci Rep 2019, 9(1):5185.
[3] Musheev MU, Baumgärtner A, Krebs L, et al. The origin of genomic N6-methyl-deoxyadenosine in mammalian cells. Nature Chemical Biology 2020, 16(6):630-634.
[4] Scaletti ER, Vallin KS, Bräutigam L, et al. MutT homologue 1 (MTH1) removes N6-methyl-dATP from the dNTP pool. J Biol Chem 2020, 295(15):4761-4772.
[5] Chen M, Urs MJ, Sánchez-González I, et al. m(6)A RNA Degradation Products Are Catabolized by an Evolutionarily Conserved N(6)-Methyl-AMP Deaminase in Plant and Mammalian Cells. Plant Cell 2018, 30(7):1511-1522.
| Expériences cellulaires [1]: | |
Lignées cellulaires | Cellules HeLa |
Méthode de préparation | Les cellules HeLa ont été collectées, digérées à la trypsine, lavées et lysées. La concentration protéique du lysat cellulaire a été déterminée par le test de Bradford. Dans un système de réaction contenant des composants tels que 40mM HEPES/KOH pH 7.8, 70mM KCl, 5m MMgCl₂, 10μM ZnCl₂ et 500μM DTT, les groupes expérimentaux avec 20μM dATP ou 16μM dATP plus 4μm N6-Methyl-dATP ont été établis. DNA matrice, les amorces et le lysat cellulaire HeLa ont été ajoutés et incubés à 37°C pendant 45 minutes. Après la réaction, les acides nucléiques ont été purifiés par extraction au phénol - chloroforme et précipitation à l'éthanol. Les nucléotides et les amorces ont été éliminés par ultrafiltration et concentration. Les produits d'amplification ont été purifiés par PAGE et précipités à l'éthanol. Le précipité de DNA a été dissous et digéré en nucléosides, puis le niveau de N6-mA a été mesuré par LC-MS. |
Conditions de réaction | 4μM; 37°C pendant 45min |
Domaines d'application | Dans les cellules mammifères, DNA polymérase peut utiliser N6-Methyl-dATP et incorporer N6-mA dans DNA. |
| Expériences animales [2]: | |
Modèles animaux | Poissons-zèbres MTH1KO |
Méthode de préparation | Les oeufs de Poisson-zèbre fertilisés MTH1WT et MTH1KO ont été groupés. Un groupe a été microinjecté avec une solution de N6-methyl-dATP. Environ 2nl d'une solution de N6-methyl-dATP à 0,3nM a été injecté dans le tampon d'injection (9µM de spermidine, 0,21µM de spermine, 0,3% de phénol rouge), tandis qu'un autre groupe n'a pas été injecté et a servi de témoin. Ensuite, les oeufs ont été divisés dans les plaques contenant un milieu E3 (5mM NaCl, 0.17mM KCl, 0.33mM CaCl2·2H2O, 0.33mM MgSO4). La viabilité des embryons de poisson-zèbre a été évaluée 24 heures après l'injection, et les poissons-zèbres ont été récoltés 32 heures plus tard. DNA des poissons-zèbre issus des différents groupes de traitement a été isolé à l'aide de Kit DNeasy Blood et Tissue. Les échantillons de DNA traités ont été hydrolysés, et diverses enzymes (nucléase P1, nucléase Benzonase, phosphatase alcaline d'Escherichia coli) ont été ajoutées et incubées à 37°C pendant 1 heure. On a précipité les protéines, récupéré le surnageant et le redissous dans de l'eau. La teneur en N6-methyl-dATP dans DNA des embryons de poisson-zèbre issus des différents groupes de traitement a été analysée par LC-MS/MS à l'aide du système triple quadripôle Agilent 6495 et de colonnes chromatographiques spécifiques ainsi que de conditions de phase mobile. |
Forme de dosage | 0.3mM; 24h |
Domaines d'application | N6-methyl-dATP est incorporé dans DNA de manière dépendante de MTH1. |
References: | |
| Cas No. | 5085-65-4(free acid) | SDF | |
| Formula | C11H18N5O12P3 (free acid) | M.Wt | 505.2 (free acid) |
| Solubility | Storage | Store at -20°C or below | |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9794 mL | 9.8971 mL | 19.7941 mL |
| 5 mM | 395.9 μL | 1.9794 mL | 3.9588 mL |
| 10 mM | 197.9 μL | 989.7 μL | 1.9794 mL |
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50% Appearance: A solution
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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