Phosbind Acrylamide |
Catalog No.GK10005
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Phosbind Acrylamide est un marqueur innovant de liaison au phosphate et une molécule fonctionnelle qui peut se lier spécifiquement aux ions phosphate dans des conditions de pH neutre (pH physiologique) et qui est souvent utilisée pour analyser le niveau de phosphorylation des protéines.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Phosbind Acrylamide est un marqueur innovant de liaison au phosphate et une molécule fonctionnelle qui peut se lier spécifiquement aux ions phosphate dans des conditions de pH neutre (pH physiologique) et qui est souvent utilisée pour analyser le niveau de phosphorylation des protéines. Ce complexe métallique bidenté (complexe 1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II)) présente une sélectivité remarquable, permettant une liaison stable aux dianions diphénylphosphate (PH-OPO32-) dans des solutions aqueuses à pH neutre, avec une valeur Kd de 25 nM (en présence de Zn2+). Phosbind fournit une technique unique d'analyse par électrophorèse connue sous le nom de SDS-PAGE manganèse (II)-Phosbind, qui permet l'analyse simultanée de la phosphorylation des protéines et des formes non phosphorylées.
Principe de séparation :
Les protéines phosphorylées capturent en électrophorèse deux ions métalliques divalents.Plus le niveau de phosphorylation est élevé, plus la mobilité électrophorétique est lente.La séparation est basée sur le degré de phosphorylation (même si le nombre de sites de phosphorylation est le même, tant que leurs positions diffèrent, la séparation peut se produire).Caractéristiques du produit :
Haute sélectivité : Phosbind lie sélectivement les groupes de phosphorylation, permettant la reconnaissance de la phosphorylation sur tous les acides aminés : Convient aux échantillons dont la taille des protéines est comprise entre 30 kDa et 130 kDa : Après liaison avec des ions métalliques tels que Zn2+ ou Mn2+, Phosbind forme un espace semi-fermé, assurant une liaison robuste et stable avec les groupes phosphates.Conditions physiologiques : Phosbind se lie efficacement aux groupes phosphates dans des conditions de pH neutre (pH 6~8).Applications : Phosbind a de nombreuses applications dans les domaines de la recherche, y compris :
Analyse de la phosphorylation des protéines : Utilisée pour identifier et analyser les états de phosphorylation des protéines, révélant l'activité des voies de signalisation.Recherche biomédicale : Détection de la phosphorylation des protéines dans les échantillons biologiques pour comprendre les mécanismes des maladies : Employé pour le criblage et l'évaluation de médicaments candidats ciblant les événements de phosphorylation.
- Mn2+- Phosbind SDS-PAGE
(1) . Préparation des réactifs pour Phosbind SDS-PAGE
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Sol. A：Solution d'acrylamide |
30％（w/v）30 w/v% Solution d'acrylamide (30% T, 3.3% C) Acrylamide-------------------------------------------------29.0 g N, N'-méthylène-bisacrylamide-------------------------1.0 g ⇒ Préparer la solution de 100 mL en ajoutant de l'eau distillée et en filtrant la solution. 【Storage】Conserver à 4℃ dans l'obscurité. |
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Sol. B：Tris-HCl tampon |
Solution Tris/HCl 1,5 mol/L, pH 8,8 (solution 4x pour le gel de résolution) Tris base (MW : 121, pKa= 8.2 à 20℃)--------------------18.2 g HCl 6,0 mol/L (0,19 équivalents de Tris)--------------------4,85 mL ⇒ Préparer la solution de 100 mL en ajoutant de l'eau distillée et filtrer la solution. 【Storage】Conserver à 4℃ dans l'obscurité. |
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Sol. C：Tampon Tris-HCl pour gel d'empilement, pH 6.8 |
Solution Tris/HCl 0,50 mol/L, pH 6,8 (solution 4x pour gel d'empilage) Tris base-----------------------------------------------------------6.06 g HCl 6,0 mol/L (0,96 équivalent de base Tris)----------------8,0 mL Eau distillée -----------------------------------------------------90 mL ⇒ Ajuster le pH à 6,8 en utilisant 6,0 mol/L HCl (environ 0,1 mL), puis préparer la solution de 100 mL en ajoutant de l'eau distillée. 100 mL en ajoutant de l'eau distillée. 【Storage】Conserver à 4℃ |
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Sol. D：SDS Solution |
Sol. D : solution SDS à 10 % (p/v) SDS----------------------------------------------------10.0 g Distilled water-----------------------------------------90 mL ⇒ Après agitation, préparer la solution de 100 ml en ajoutant de l'eau distillée. 【Storage】Conserver à 4℃ |
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Sol. E：Phosbind Solution |
Solution de Phosbind à 5,0 mmol/L contenant 3 % (v/v) de méthanol. Phosbind Acrylamide (MW : 595)------------------------10 mg (2 mg) méthanol ----------------------------------------------------0.10 mL (0.02 mL) Eau distillée-----------------------------------------------3,2 mL (0,64 mL) Le produit huileux, Phosbind Acrylamide, est fourni dans un petit tube en plastique. Veuillez le dissoudre complètement dans 0,1 mL de méthanol. Cette solution de méthanol doit être diluée avec 3,2 ml d'eau distillée par pipetage. Remarque : si une trace de matière insoluble apparaît sous la forme d'une fine poudre blanche (impureté) dans la solution, il convient de la diluer dans de l'eau distillée. (impureté) dans la solution, elle peut être séparée par centrifugation (2000 x g, 10 min) en utilisant des microtubes de 2 ml. 【Storage】Envelopper le tube avec une feuille d'aluminium. Conserver la solution dans un microtube de 2 ml à 4℃ dans l'obscurité. |
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Sol. F：MnCl2 Solution |
Solution de MnCl2 à 10 mmol/L MnCl2(H2O)4（MW：198）---------------------0.10 g Eau distillée -------------------------------------50 mL Note : Ne pas utiliser d'autres sels anioniques tels que Mn(NO3) 2 ou Mn(CH3COO) 2. Des précipités blancs (Mn(OH)2) se formeront dans les solutions aqueuses basiques et s'oxyderont progressivement pour devenir bruns (MnO(OH)), et le gel sera pigmenté. En outre, les fonctions de Mn2+ se détérioreront. |
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Sol. G：APS Solution |
10%（w/v）Ammonium Persulfate Solution (NH4) 2S2O8（MW：228）----------------------10 mg Eau distillée -------------------------------------0.10 mL ⇒ ⇒ La solution préparée Sol. G peut être conservé pendant une longue période à -20℃ par aliquotage dans une quantité appropriée. |
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Sol. H：Running Buffer |
Tampon de fonctionnement，pH 8.3（10xsolution） Tris base（0.25 mol/L）-----------------------15.1 g SDS------------------------------------------------5.0 g glycine（1.92mol/L）---------------------------72.0 g ⇒ Préparer la solution de 500 mL en ajoutant de l'eau distillée. Éviter d'ajuster le pH en ajoutant un acide ou une base. Juste avant l'utilisation, ajouter 450 mL d'eau distillée à 50 mL de Sol. H. 【Storage】 Garder à 4℃ |
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Sol. I：Tampon échantillon |
Tampon d'échantillon (solution 3x) Bleu de bromophénol (BPB)------------------------1.5 mg SDS--------------------------------------------------0.60 g Glycérol --------------------------------------------3.0 mL Sol. C：0.50mol/L Tris/HCl，pH 6.8 ----------3.9 mL 2-mercaptoéthanol -------------------------------1.5 mL ⇒ Préparer la solution de 10 mL en ajoutant de l'eau distillée. 【Storage】 Conserver à -20℃ |
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Sol. J：Fixation Solution
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Solution acide pour la fixation des protéines (1 L) acide acétique -----------------------------------------0.10 L méthanol -------------------------------------------0.40 L Eau distillée -------------------------------------0.50 L |
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Sol. K：CBB Solution de coloration.
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Solution de coloration CBB (0.5 L) Bleu brillant de Coomassie (CBB) ----------------1.25 g méthanol --------------------------------------------0.20 L Acide acétique -----------------------------------------50 mL Eau distillée -------------------------------------0.25 L ⇒ Dissoudre le CBB dans le méthanol, puis ajouter l'acide acétique et l'eau. |
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Sol. L：Washing and |
Solution de lavage et de décoloration. Solution de lavage et de décoloration (1 L) methanol-------------------------------------------0.25 L acide acétique-----------------------------------------0.10 L Eau distillée-------------------------------------0.65 L |
(2). Préparation du gel de résolution
Solution de gel de résolution (0,375 mol/L Tris, 0,1 mmol/L MnCl2, 0,1 % SDS)
(En cas de préparation de la solution de 10 ml avec un gel de polyacrylamide à 12 w/v % et 50 μmol/L de PB-A).
Sol. A : Solution d'acrylamide à 30 % (p/v)----------------------------------------- 4,00 mL
Sol. B : Solution Tris/HCl 1,5 mol/L, pH 8,8------------------------------------ 2,50 mL
Sol. E : solution de PB-A à 5,0 mmol/L------------------------------------------------0,10 mL
Sol. F : Solution de MnCl2 10 mmol/L----------------------------------------------- 0,10 mL *1)
Sol. D : Solution de SDS à 10 % (p/v)------------------------------------------------- 0.10 mL
TEMED (tétraméthyléthylènediamine) ----------------------------------------- 10 μL *2)
Distilled Water----------------------------------------------------------------------- 3.14 mL
Diluer en agitant pendant 2 minutes.
Sol. G : 10% (w/v) Ammonium Persulfate Solution----------------------------50 μL *2)
*1) Pour la solution de MnCl2, deux fois la concentration de PB-A (rapport molaire) sont ajoutées.
*2) La concentration normalement utilisée peut être utilisée pour TEMED et Sol.G. Les quantités ajoutées ci-dessus sont des exemples.
Note : Veuillez optimiser la concentration de Sol. E (PB-A) et Sol. A (Acrylamide). Se référer au point 4. Optimisation de la condition de PAGE PB-A
Exemples de préparation de 10 ml de solution de gel de résolution
Examples of preparation of 10 mL of resolving gel solution
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Phosbind Acrylamide conc. |
20 μM |
50 μM |
100 μM |
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Acrylamide conc. |
12% |
10% |
8% |
6% |
12% |
10% |
8% |
6% |
12% |
10% |
8% |
6% |
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Sol. A (mL) |
4 |
3.33 |
2.67 |
2 |
4 |
3.33 |
2.67 |
2 |
4 |
3.33 |
2.67 |
2 |
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Sol. B (mL) |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
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Sol. E (mL) |
0.04 |
0.04 |
0.04 |
0.04 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
|
Sol. F (mL) |
0.04 |
0.04 |
0.04 |
0.04 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
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Sol. D (mL) |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
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TEMED (mL) |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
|
Distilled water (mL) |
3.26 |
3.93 |
4.59 |
5.26 |
3.14 |
3.81 |
4.47 |
5.14 |
2.94 |
3.61 |
4.27 |
4.94 |
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Sol. G |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
(3). Préparation du gel d'empilage
Solution de gel d'empilage (0,125 mol/L Tris, 0,1% SDS)
（En cas de préparation de 10 mL (2 mL) de gel de polyacrylamide à 4,5 %).
※Les quantités indiquées entre parenthèses sont nécessaires pour la préparation de 2 mL.
Sol. A : 30% (w/v) Acrylamide Solution-----------------------------------------1.50 mL (0.30 mL)
Sol. C : solution de Tris/HCl 0,50 mol/L, pH 6,8----------------------------------2,50 mL (0,50 mL)
Sol. D : Solution SDS à 10 % (p/v)-------------------------------------------------0.10 mL (20 μL)
TEMED (tétraméthyléthylènediamine) ---------------------------------------- μL (2 μL) *2)
Eau distillée----------------------------------------------------------------------5.84 mL (1.17 mL)
Chélater avec agitation pendant 2 minutes.
Sol. G : 10% (w/v) Ammonium Persulfate Solution---------------------------50 μL (10 μL) *2)
*2) La concentration normalement utilisée peut être utilisée pour TEMED et Sol.G. Les quantités ajoutées ci-dessus sont des exemples.
(4). Préparation de l'échantillon
1) Mélanger l'échantillon avec 3 μL de solution I (tampon d'échantillon) et ajouter une quantité appropriée d'eau distillée pour obtenir une solution de 9 μL dans un tube de microcentrifugeuse.
2) Chauffer à 95℃ pendant 5 minutes, puis, laisser la solution refroidir à température ambiante.
3) Charger la solution d'échantillon (ex : 1,5 μL/puits) à l'aide d'une micropipette.
※ Dans le cas de la β-caséine, charger 5～10 μg/puits pour obtenir des bandes claires.
(5). Électrophorèse
1) Assembler les équipements d'électrophorèse et remplir les chambres d'électrodes avec Sol. H (tampon de fonctionnement).
2) Retirer délicatement le peigne du gel d'empilage et charger l'échantillon dans chaque puits à l'aide d'une micropipette.
3) Connecter les fils à l'alimentation électrique. Faire fonctionner le gel sous une condition de courant constant (25-30 mA/gel) jusqu'à ce que le BPB atteigne le fond du gel de résolution.
(※Dans le cas de deux gels, faire fonctionner les gels à 50～60 mA.)
※Lors d'un Western blotting, se référer à la section 2 ci-dessous après la migration électrophorétique.
(6). Coloration CBB・Destaining
1) Juste après l'électrophorèse, le gel est trempé dans 50 ml de Sol. J (solution acide pour la fixation des protéines) pendant environ 10 minutes en agitant légèrement. 10 minutes avec une légère agitation.
2) Colorer le gel en le trempant dans 50 ml de Sol. K (Solution de coloration CBB) pendant environ 2 heures en agitant doucement. 2 heures en agitant doucement.
3) Laver le gel dans 50 ml de Sol. L (solution de lavage et de dénaturation) 3 fois pour éliminer l'excès de colorant jusqu'à ce que le fond soit suffisamment clair.
4) Prendre une photographie du gel.
- Conseils pour le Western blotting des gels PB-A SDS-PAGE
Après l'électrophorèse, une procédure supplémentaire, à savoir l'élimination de l'ion manganèse (Mn2+) du gel à l'aide d'un agent chélateur (EDTA), est nécessaire avant l'électro-buvardage. Cette procédure augmente l'efficacité du transfert des protéines phosphorylées et non phosphorylées sur une membrane PVDF.
1) Juste après l'électrophorèse, le gel est trempé dans un tampon de transfert général contenant 1-10 mmol/L d'EDTA pendant un minimum de 10 minutes avec une légère agitation. (pendant 10 minutes x 1-3 fois).
※ Modifier la température et la durée du traitement avec le tampon de transfert EDTA en fonction de l'épaisseur du gel, etc. (ex : 1,5 mm d'épaisseur : 20 minutes de traitement x 2 fois).
※ En plus du tampon de transfert, 1 x tampon d'exécution peut également être utilisé.
2) Ensuite, le gel est trempé dans un tampon de transfert général sans EDTA pendant 10 minutes avec une légère agitation (pendant 10 min. x 1 fois).
※ une méthode en cuve humide est fortement recommandée pour un transfert efficace des protéines du gel d'acrylamide Mn2+ -PB-A à la membrane PVDF. (La méthode semi-sèche peut également être utilisée).
※ Les conditions de blotting, telles que la durée et la température, doivent être optimisées pour votre protéine cible phosphorylée dans le gel PB-A.
- Résolution des problèmes
(1). Distorsion des bandes
La plainte la plus fréquente concernant le PB-A SDS-PAGE est la « distorsion des bandes ». Veillez en particulier à ne pas contenir d'EDTA dans vos échantillons.
1) Marqueur précoloré : Non seulement la voie du marqueur mais aussi la voie de l'échantillon peuvent être affectées en raison d'une différence de concentration en sel entre les voies.
⇒ Les marqueurs précolorés ne doivent pas être utilisés. Nous recommandons d'utiliser un échantillon traité à la phosphatase alcaline ou une protéine recombinante de votre cible comme contrôle négatif de la phosphorylation au lieu d'utiliser des marqueurs précolorés.
2) Échantillon acide : Les bandes peuvent être déformées.
⇒Si la solution est de couleur jaune à orange même après avoir chargé le tampon d'échantillon, ajouter du tampon Tris jusqu'à ce qu'elle soit neutre (violette).
3) L'EDTA (Mn2+ est chélaté), l'acide vanadique, les sels inorganiques, les agents de surface, etc.
⇒ Dessaler par précipitation au TCA ou par dialyse.
4) Couloirs vierges : Les bandes vierges peuvent provoquer des distorsions.
⇒Chargez la même quantité de tampon 1 x échantillon dans les voies vierges.
5) Acide vanadique : La liaison compétitive avec l'acide phosphorique peut entraîner une distorsion.
⇒Utiliser un inhibiteur de phosphatase différent ou éliminer l'acide vanadique par précipitation avec du TCA ou par dialyse.
6) L'ajout de MnCl2 à l'échantillon à appliquer (par exemple : concentration finale de 1 mM) peut améliorer les résultats.
⇒Si l'échantillon contient un résidu d'EDTA, c'est que le Mn2+ ajouté est chélaté au lieu du Mn2+ contenu dans le gel.
(2). Faible résolution
1) L'augmentation du rapport molaire entre MnCl2 et Phosbind peut améliorer la résolution. (ex : 1:4)
2) L'adoption du tampon Tris-Tricine comme tampon de fonctionnement peut améliorer la résolution.
(3). Diffusion des protéines
La migration à long terme avec un courant constant entraînera la décomposition et la diffusion des protéines en raison de la chaleur excessive.
1) Si vous souhaitez utiliser un courant constant pour la migration, essayez des techniques telles que l'utilisation d'une pièce à basse température, le refroidissement complet du tampon de migration juste avant l'utilisation et l'enroulement d'un agent de refroidissement autour du réservoir de migration (mais n'utilisez pas de glace car cela pourrait provoquer un choc électrique).
2) Lorsqu'une tension constante peut également être utilisée, migrer avec une tension constante (ex : 200 V). La vitesse de migration sera ralentie mais la production de chaleur sera supprimée.
(4). Rupture facile du gel
Le gel est ramolli en raison de la faible concentration d'acrylamide.
1) 5% ou plus : L'augmentation du rapport N,N'-méthylène-bisacrylamide/acrylamide (ex : 24:1) renforcera le gel.
2) Ajouter 3 à 5 % d'agarose pour renforcer les gels.
(5). Problèmes de transfert sur la membrane
1) Le traitement à l'EDTA peut être insuffisant. Augmentez la durée du traitement, changez fréquemment le tampon contenant de l'EDTA (ex : 20 min. x 2 fois), ou agitez complètement pendant le traitement à l'EDTA.
2) L'intensification du courant électrique peut améliorer l'efficacité (ex : 200 mA).
3) Une coloration autre qu'une coloration négative, telle que la coloration CBB, peut diminuer l'efficacité du transfert.
4) L'utilisation d'un gel à faible concentration améliore l'efficacité du transfert.
5) Prendre des mesures telles que l'utilisation d'un gel épais et l'augmentation de la quantité d'échantillon appliquée.
6) Un tampon de transfert contenant du SDS peut améliorer l'efficacité du transfert. Lors du transfert sur une membrane, ajoutez immédiatement la solution de SDS au tampon de transfert pour éviter la formation de mousse (méthode du réservoir) ou, entre le traitement à l'EDTA et le transfert, immergez le gel dans un tampon de transfert contenant du SDS et agitez lentement (par exemple : pendant 10 min. x 1 fois). Essayez des concentrations de SDS de 0,05 à 0,20 %.
(6). Fond plus élevé pendant la coloration
Colorer après avoir éliminé les ions métalliques du gel par traitement à l'EDTA.
(7). Déplacement de mobilité dû à la dégradation de la protéine, non induit par la phosphorylation
Effectuer un SDS-PAGE comme d'habitude (contenant 0 μM de PB-A) et vérifier qu'aucun déplacement de mobilité ne se produit.
- Optimisation des conditions de PB-A PAGE
Pour obtenir un résultat de haute qualité en utilisant le PB-A PAGE, l'optimisation de la concentration d'acrylamide et de PB-A est essentielle. Optimisez d'abord la concentration d'acrylamide (1), puis celle de PB-A (2).
(1). Optimisation de la concentration d'acrylamide
Il faut d'abord identifier la concentration optimale d'acrylamide* qui permet la migration de la protéine cible vers l'extrémité inférieure du gel lors d'un SDS-PAGE conventionnel.
Dans le PB-A PAGE, la vitesse de migration est plus lente que dans le SDS-PAGE conventionnel (y compris pour les protéines non phosphorylées) et, par conséquent, la concentration d'acrylamide doit être examinée. La vitesse de migration diminue lorsque la concentration de PB-A augmente.
* : Effectuer une électrophorèse sur gel jusqu'à ce que le colorant BPB, qui est contenu dans le tampon de l'échantillon, atteigne le bas du gel de résolution. La position du colorant BPB peut être définie comme une valeur Rf de 1,0. Dans les conditions susmentionnées, ajuster la concentration optimale d'acrylamide. Lorsque votre protéine cible est observée comme une bande de migration à une valeur Rf de 0,8 à 0,9 dans le SDS-PAGE conventionnel, la concentration d'acrylamide est optimale pour le PB-A SDS-PAGE.
plus de 60 kDa : 6% ; moins de 60 kDa : 8%.
La force du gel peut être augmentée en ajoutant de l'agarose aux gels qui contiennent moins de 4 % d'acrylamide. Il y a une donnée de séparation de 350 kDa. (Voir « Séparation de Phosbind » de la Sec. 6. FAQ). En outre, la force du gel peut également être améliorée en augmentant la teneur en N,N'-méthylènebisacrylamide (par exemple : 5% d'acrylamide [24:1]).
(2). Optimisation de la concentration de Phosbind.
Optimisez ensuite la concentration de Phosbind. Veuillez évaluer la concentration optimale dans l'ordre de la plus faible à la plus élevée. ex : 20 μM→50 μM→100 μM.
【Lysat cellulaire】
Si votre échantillon contient une grande variété de protéines, par exemple des lysats cellulaires, la concentration de Phosbind doit être comprise entre 5 et 25 μM. Cependant, une concentration plus élevée, par exemple 100 μM, est recommandée dans le cas d'une concentration plus faible de la protéine cible, par exemple : systèmes non surexprimés.
※ La condition optimale dépend de la protéine. Veuillez trouver le paramètre de condition approprié pour chaque protéine cible.
5. FAQ
1) Quelle taille (kDa) une protéine peut-elle être séparée à l'aide de ce produit ?
R : Une protéine phosphorylée de 350 kDa a effectivement été séparée avec 20 μM Phosbind, 3 % d'acrylamide et 0,5 % d'agarose*.
* L'agarose a été ajouté pour renforcer le gel.
2) Comment peut-on améliorer la résolution ?
R : En général, une concentration plus élevée de Phosbind entraîne une meilleure résolution. Cependant, l'augmentation de la concentration de Phosbind entraîne également une diminution proportionnelle de la vitesse de migration globale de la protéine.
3) Est-il possible d'utiliser d'autres techniques de coloration du gel que le CBB ?
R : Oui, le gel peut également être coloré par coloration négative, coloration à l'argent et coloration fluorescente.
4) Le gel se casse facilement. Que puis-je faire ?
R : Une faible concentration d'acrylamide rend le gel mou. Vous pouvez résoudre ce problème en augmentant la quantité relative de méthylènebisacrylamide par rapport à l'acrylamide (24:1), par exemple.
5) Combien de temps le gel préparé contenant Phosbind peut-il être conservé ?
R : Le gel se détériore en quelques jours. Il doit donc être préparé juste avant d'être utilisé.
6) Combien de temps peut-on conserver les solutions dans le méthanol et l'eau ?
R : Aucune baisse remarquable des performances n'a été signalée pendant 6 mois au réfrigérateur et à l'abri de la lumière. Les solutions semblent pouvoir être conservées pendant 1 an sans problème selon les médecins qui utilisent le produit.
7) J'ai constaté un trouble du Phosbind lorsque j'ai préparé une solution comme décrit dans le protocole. Est-ce normal ?
R : Oui, c'est normal. Le trouble est attribué au méthanol. La solution devient claire après avoir reposé pendant un certain temps.
8) Le Phosbind se dissout-il dans l'eau seule ?
R : Il est soluble dans l'eau, mais cela prend plus de temps que la dissolution dans l'eau contenant du méthanol. S'il ne se dissout pas complètement, centrifugez la solution et utilisez le surnageant.
9) Quels marqueurs précolorés peut-on utiliser ?
R : L'utilisation d'un marqueur précoloré avec le gel Phosbind provoque généralement une distorsion des bandes. Au moins une voie vierge est nécessaire entre la solution contenant ce marqueur et les autres solutions.
10) L'ATP dans une solution de réaction de phosphorylation affecte-t-il l'électrophorèse ?
R : L'ATP n'a pas eu d'effet particulier à une concentration de 2,0 mM. La limite d'utilisation n'a pas encore été étudiée.
11) Un changement de mobilité a été observé dans le SDS-PAGE Phosbind. Comment puis-je savoir s'il s'agit d'un signe de phosphorylation ou d'une simple indication que la protéine a été dégradée ?
R : Veuillez effectuer un SDS-PAGE conventionnel (sans Phosbind) et vérifier que votre protéine est intacte.
| Components | Formula | M.Wt | Solubility |
| Phosbind Acrylamide | C33H38N8O3 | 594.71 | DMSO: >29.7 mg/mL |
| MnCl2·4H2O | MnCl2(H2O)4 | 197.90 | Water: >1 g/mL |
| Applications |
High selectivity: Phosbind can specifically bind phosphorylation groups and recognize the phosphorylation of all amino acids.
Widely applicable: Suitable for samples with protein sizes between 30 KDa and 130 KDa. Stability: Phosbind forms a semi enclosed space when combined with metal ions (such as Zn2+or Mn2+), which can firmly and stably bind phosphate groups. Physiological conditions: Phosbind can effectively bind phosphate groups within a neutral pH range (pH 6-8). |
| Shipping | Blue ice transportation or according to your needs. |
| Storage Conditions | 2-8℃ for 1 year |
| Usage | For research use only! Not for use on humans. |
- View current batch:
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