4-Hydroxymephenytoin |
Catalog No.GC33522
One-Click Copy Product Info
|
4-Hydroxymephenytoin es el principal metabolito de la mefenitoína en el cuerpo humano catalizado por CYP2C19, un fármaco antiepiléptico y un sustrato típico de CYP2C19
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 61837-65-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
4-Hydroxymephenytoin es el principal metabolito de la mefenitoína en el cuerpo humano catalizado por CYP2C19, un fármaco antiepiléptico y un sustrato típico de CYP2C19 [1]. 4-Hydroxymephenytoin se utiliza a menudo para desarrollar métodos de espectrometría de masas en tándem de cromatografía líquida de ultra rendimiento (UPLC) para evaluar los fármacos de la sonda CYP y sus metabolitos relacionados en muestras de orina humana o plasma [2-3].
References:
[1]. Tanaka M, Kato K, Sudo KI, et al. Simple and selective assay of 4-hydroxymephenytoin in human urine using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography with electrochemical detection and its preliminary application to phenotyping test. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 1996 Feb 9; 676(1): 87-94.
[2]. Stewart NA, Buch SC, Conrads TP, et al. A UPLC-MS/MS assay of the “Pittsburgh cocktail”: six CYP probe-drug/metabolites from human plasma and urine using stable isotope dilution. Analyst. 2011; 136(3): 605-612.
[3]. Zhou HH. CYP2C19 genotype determines enzyme activity and inducibility of S-mephenytoin hydroxylase. Clinica chimica acta. 2001 Nov 1; 313(1-2): 203-208.
Este protocolo solo proporciona orientación experimental. La aplicación real debe optimizarse y ajustarse de acuerdo con sus objetivos de investigación, sistema de expresión y plataforma de análisis [1-2].
1. Preparación de reactivos y materiales:
Fuente de enzimas CYP2C19 (como microsomas hepáticos humanos, líneas celulares de expresión transfectadas o proteína enzimática recombinante).
Sustrato de la sonda: S-mephenytoin.
Amortiguador de reacción: PBS.
Coenzima NADPH: utilizada para iniciar la reacción metabólica.
Disolvente orgánico: acetonitrile, methanol, utilizado para terminar la reacción.
Estándar interno de espectrometría de masas: estándar interno enantiomérico.
Estándar de 4-Hydroxymephenytoin: se utiliza para la comparación cuantitativa.
Instrumento de detección: sistema UPLC-MS/MS.
2. Configuración del sistema de reacción:
(1) Agregue los siguientes componentes de reacción a un tubo centrífugo (diseñado para un volumen final de 200μL):
Tampón Tris-HCl (100mM, pH 7.4).
Fuente de enzimas CYP2C19 (concentración final: 0.1-0.5mg/mL de proteína).
S-mephenytoin (10-100μM, optimizada según el valor de Km).
NADPH (1 mM, preparado immediatamente).
(2) Precalentar la mezcla a 37°C durante 5 minutos.
(3) Después de añadir NADPH, la reacción se inicia oficialmente y se incuba a 37°C durante 20-60 minutos.
3. Terminación y extracción:
(1) Después de completar la reacción, agregue inmediatamente un volumen igual de acetonitrilo helado o metanol para terminar la reacción.
(2) Centrifuga a alta velocidad (13,000 rpm, 10 minutos) y recoge el sobrenadante para su posterior detección.
4. Análisis y detección (UPLC-MS/MS):
(1) Analizar la concentración de 4-Hydroxymephenytoin usando UPLC-MS/MS.
(2) Cuantificar utilizando el método estándar interno o el método de curva estándar.
(3) Calcule la actividad CYP2C19 basada en la tasa de generación del producto por unidad de tiempo.
5. Interpretación y aplicación de datos:
Evaluar la expresión o el nicel de actividad de la enzima CYP2C19 comparando la tasa de generación de 4-Hydroxymephenytoin.
Si se utiliza para la tipificación del metabolismo de los medicamentos, se puede utilizar para distinguir entre metabolizadores rápidos (EM) y metabolizadores lentos (PM).
Se puede utilizar para la detección de inhibidores, estudios cinéticos enzimáticos o evaluación del metabolismo de fármacos in vitro.
Precauciones de opesración:
1. S-mephenytoin es un sustrato fotosensible, evite la exposición a la luz fuerte.
2. NADPH debe prepararse inmediatamente antes de su uso para evitar la inactivación oxidativa del sistema de reacción.
3. Se recomienda utilizar el mismo lote de fuentes de enzimas CYP para reducir las diferencias por lotes.
4. Mantenga el pH y la temperatura constantes en el sistema de reacción.
5. El análisis UPLC-MS/MS recomienda el uso de estándares internos de isótopos estables para mejorar la precisión cuantitativa.
References:
[1]. Stewart NA, Buch SC, Conrads TP, et al. A UPLC-MS/MS assay of the “Pittsburgh cocktail”: six CYP probe-drug/metabolites from human plasma and urine using stable isotope dilution. Analyst. 2011; 136(3): 605-612.
[2]. Zhou HH. CYP2C19 genotype determines enzyme activity and inducibility of S-mephenytoin hydroxylase. Clinica chimica acta. 2001 Nov 1; 313(1-2): 203-208.
| Cas No. | 61837-65-8 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1N(C)C(C(C2=CC=C(O)C=C2)(CC)N1)=O | ||
| Formula | C12H14N2O3 | M.Wt | 234.26 |
| Solubility | DMF: 25 mg/ml,DMSO: 25 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:1): 0.5 mg/ml,Ethanol: 15 mg/ml | Storage | Store at 4°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.2688 mL | 21.3438 mL | 42.6876 mL |
| 5 mM | 853.8 μL | 4.2688 mL | 8.5375 mL |
| 10 mM | 426.9 μL | 2.1344 mL | 4.2688 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 26 reference(s) in Google Scholar.)