4-Hydroxymephenytoin |
カタログ番号GC33522
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4-Hydroxymephenytoinは、人体内で、CYP2C19に触媒されたmephenytoinの主な代謝物であり、抗癲癇の薬物で、CYP2C19の典型的な基質である。
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Cas No.: 61837-65-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
4-Hydroxymephenytoinは、人体内で、CYP2C19に触媒されたmephenytoinの主な代謝物であり、抗癲癇の薬物で、CYP2C19の典型的な基質である[1]。4-Hydroxymephenytoinはよく、超高速液体クロマトグラフィー（UPLC）タンデム質量分析法の開発に使われ、よってヒトの尿または血漿サンプルにおけるCYPプローブ薬物と関連の代謝物を評価する[2-3]。
References:
[1]. Tanaka M, Kato K, Sudo KI, et al. Simple and selective assay of 4-hydroxymephenytoin in human urine using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography with electrochemical detection and its preliminary application to phenotyping test. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 1996 Feb 9; 676(1): 87-94.
[2]. Stewart NA, Buch SC, Conrads TP, et al. A UPLC-MS/MS assay of the “Pittsburgh cocktail”: six CYP probe-drug/metabolites from human plasma and urine using stable isotope dilution. Analyst. 2011; 136(3): 605-612.
[3]. Zhou HH. CYP2C19 genotype determines enzyme activity and inducibility of S-mephenytoin hydroxylase. Clinica chimica acta. 2001 Nov 1; 313(1-2): 203-208.
このプロトコールは実験のガイダンスのみを提供する。実際の応用は、ご自分の研究目的、発見システムと分析プラットフォームに応じて最適化し、調整しなければならない[1-2]。
1.試薬と材料の調製：
CYP2C19酵素源（例えばヒト肝臓ミクロソーム、遺伝子導入された発見細胞株または組み換え酵素タンパク質など）。
プローブ基質：S-mephenytoin。
反応緩衝液：PBS。
NADPH補酵素：代謝反応の開始に使われる。
有機溶媒：アセトニトリル、メタノール、反応の終了に使われる。
質量分析内部標準：鏡像異性の内部標準。
4-Hydroxymephenytoinの標準：定量比較に使われる。
検出装置：UPLC-MS/MSシステム。
2.反応システム構成：
(1)下記の反応化合物を遠心分離管（200μLの最終容量に設計され）に添加する：
Tris-HCl緩衝液（100mM、pH 7.4）
CYP2C19酵素源（最終濃度：0.1-0.5mg/mLタンパク質）
S-mephenytoin (10-100μM、Km値に応じて最適化された)
NADPH (1 mM、直ちに調製)
(2)37℃で、混合物を5分間事前加熱する。
(3)NADPHを添加した後、反応を正式に始め、37℃で20-60分間培養した。
3.反応の終了と抽出：
(1)反応の完了後に、反応を終わらせるために、等量の氷冷アセトニトリルまたはメタノールを速やかに添加する。
(2)高速度（13,000 rpm、10分間）で遠心分離し、後続する検出のために、上清を採集する。
4.分析と検出(UPLC-MS/MS)：
(1)UPLC-MS/MSで、4-Hydroxymephenytoinの濃度を分析する。
(2)内部標準法または標準曲線法で定量する。
(3)1単位時間あたりの製品生成率に基づき、CYP2C19活性を計算する。
5.データの解釈と応用：
4-Hydroxymephenytoinの生成速度を比較することで、CYP2C19酵素の発見または活性レベルを評価する。
薬物代謝分類法に使われる場合は、早い代謝（EM）と遅い代謝（PM）の間の区別に使われる。
阻害剤のスクリーニング、酵素動力学の研究、または体外薬物代謝の評価に使われる。
行動の注意事項：
1.S-mephenytoinは、光感受性の基質であり、光への強い暴露を避けるべき。
2.反応システムの酸化不活性化を避けるため、使用前にNADPHを直ちに調製するべき。
3.バッチによる差を減らすために、同じバッチのCYP酵素源の使用を推奨する。
4.反応システムでpHと温度を一定の値に保持する。
5.定量の正確率をあげるために、UPLC-MS/MS分析は、安定したアイソトープ内部標準の使用を推奨する。
References:
[1]. Stewart NA, Buch SC, Conrads TP, et al. A UPLC-MS/MS assay of the “Pittsburgh cocktail”: six CYP probe-drug/metabolites from human plasma and urine using stable isotope dilution. Analyst. 2011; 136(3): 605-612.
[2]. Zhou HH. CYP2C19 genotype determines enzyme activity and inducibility of S-mephenytoin hydroxylase. Clinica chimica acta. 2001 Nov 1; 313(1-2): 203-208.
| Cas No. | 61837-65-8 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1N(C)C(C(C2=CC=C(O)C=C2)(CC)N1)=O | ||
| Formula | C12H14N2O3 | M.Wt | 234.26 |
| 溶解度 | DMF: 25 mg/ml,DMSO: 25 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:1): 0.5 mg/ml,Ethanol: 15 mg/ml | Storage | Store at 4°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.2688 mL | 21.3438 mL | 42.6876 mL |
| 5 mM | 853.8 μL | 4.2688 mL | 8.5375 mL |
| 10 mM | 426.9 μL | 2.1344 mL | 4.2688 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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