Collagenase I (Synonyms: Collagenase; collagen hydrolase) |
Catalog No.GC19589
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Actuellement, Collagenase Ⅰcomporte approximativement quatre types : la collagénase de type I, la collagénase de type II, la collagénase de type III et la collagénase de type IV, qui possèdent les applications spécifiques : Collagénase de type I : Contient une variété relativement uniforme d'activités enzymatiques (comprendre la collagénase, la caséinase, la clostripipine et l'activité de trypsine).
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 9001-12-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Actuellement, Collagenase Ⅰcomporte approximativement quatre types : la collagénase de type I, la collagénase de type II, la collagénase de type III et la collagénase de type IV, qui possèdent les applications spécifiques : Collagénase de type I : Contient une variété relativement uniforme d'activités enzymatiques (comprendre la collagénase, la caséinase, la clostripipine et l'activité de trypsine). C'est communément utilisé pour la préparation de cellules épithéliales et de cellules tissulaires. La collagénase de type II : Contient une activité de clostripipine plus élevée et est généralement utilisée pour la préparation de cellules à partir de tissus tels que le coeur, l'os, le muscle, le thymus et le cartilage. La collagénase de type III : Contient une activité protéolytique plus faible et est fréquement utilisée pour la préparation de cellules de glande mammaire. La collagénase de type IV : Contient une faible activité de trypsine et est généralement employée pour la préparation de cellules d'îlot pancréatique ou pour la préparation de cellules dans les expériences où l'intégrité du récepteur doit être maintenue.
Collagenase I est classifiée en tant qu'une protéinase dérivée de Bacillus histolyticus avec la capacité de cliver les liaisons entre l'acide aminé neutre et les résidus de glycine au sein des séquences Pro-X-Gly-Pro, qui sont largement trouvés dans les protéines de collagène.
Collagenase I est relativement douce, avec un équilibre initial de l'activité de collagénase, de caséinase, de protéase de clostridium et de trypsine, et est bien dissocié à température et pH physiologique. pH optimal de Collagenase I est 7 ~ 8.
Il a la capacité unique de digérer le collagène naturel et le collagène dénaturé. Unique parmi les protéases, Collagenase I possède possède la capacité de décomposer les fibres de collagène naturel à triple hécile qui sont abondantes dans les tissus conjonctifs tels que la peau, les tendons, les vaisseaux sanguins et les os. La dégradation protéolytique facilitée par la collagénase est employée dans la digestion enzymatique de tumeurs humaines, de reins de rats, de cerveaux adultes et foetaux, et divers autres tissus, (comprendre ceux qui présentent les constituants épithéliaux). Il agit exclusivement sur le procollagène, le brisant puis le faisant hydrolyser par les autres protéases, sans hydrolyser la fibrine et la globuline. Les détergents, l'hexachlorocyclohexane et les ions métalliques lourds peuvent réduire l'activité enzymatique[1-5]. Collagenase I (injection intraveineuse) peut réduire temporairement la pression du liquide interstitiel (IFP) par la digestion du collagène dans les tumeurs et augmenter l'accumulation tumorale et l'expression génique des lipoplexes[6].
La définition de l'activité : Une unité d'hydrolyse FALGPA hydrolyse 1.0 µmole furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à pH 7.5 à 25 °C en présence d'ions calcium. Une unité de protéase neutre hydrolyse de la caséine pour produire une couleur équivalente à 1.0 µmole tyrosine par 5 heures à pH 7.5 à 37℃. Une unité de clostripipine hydrolyse 1.0 µmole BAEE par minute à pH 7.6 à 25℃ en présence de DTT.
References:
[1]. Pilcher BK, Sudbeck BD, et,al. Collagenase-1 and collagen in epidermal repair. Arch Dermatol Res. 1998 Jul;290 Suppl:S37-46. doi: 10.1007/pl00007452. PMID: 9710382.
[2]. Ohbayashi N, Yamagata N, et,al.Enhancement of the structural stability of full-length clostridial collagenase by calcium ions. Appl Environ Microbiol. 2012 Aug;78(16):5839-44. doi: 10.1128/AEM.00808-12. Epub 2012 Jun 8. PMID: 22685155; PMCID: PMC3406112.
[3]. Brandhorst H, Brandhorst D, et,al. Successful human islet isolation utilizing recombinant collagenase. Diabetes. 2003 May;52(5):1143-6. doi: 10.2337/diabetes.52.5.1143. PMID: 12716744.
[4]. Hamzeh Alipour, et al. Therapeutic applications of collagenase (metalloproteases): A review. Asian Pac J Trop Biomed, 2016, 6(11): 975-981.
[5]. O'Flanagan CH, Campbell KR, et,al. Dissociation of solid tumor tissues with cold active protease for single-cell RNA-seq minimizes conserved collagenase-associated stress responses. Genome Biol. 2019 Oct 17;20(1):210. doi: 10.1186/s13059-019-1830-0. PMID: 31623682; PMCID: PMC6796327.
[6]. Kato M, Hattori Y, Kubo M, Maitani Y. Collagenase-1 injection improved tumor distribution and gene expression of cationic lipoplex. Int J Pharm. 2012 Feb 28;423(2):428-34. doi: 10.1016/j.ijpharm.2011.12.015. Epub 2011 Dec 17. PMID: 22197775.
Protocole pour l'isolement de tissus à l'aide de Collagenase I:
La concentration de la solution de stock de Collagenase I est généralement 1 g/mL (1000×). Petite dose, c'est stockée à -20℃ loin de la lumière. Décongeler sur glace avant utilisation pour éviter les cycles de congélation-décongélation répétés. Les concentrations communément utilisées pour la dispersion de tissus et de cellules sont 0.5-2.5 mg/mL, et 1-2 mg/mL pour la digestion du cartilage.
1.Utiliser un scalpel stérile ou les ciseaux pour couper le tissu en blocs de tissu de 3~4 mm taille.
2.Les blocs de tissus ont été lavés plusieurs fois par HBSS contenant Ca2+, Mg2+.
3.Une quantité suffisante de HBSS contenant Ca2+, Mg2+ a été ajoutée pour immerger la masse de tissu, et Collagenase I a été ajouté.
4.Incuber à 37°C pendant 4-18h pour la digestion, et utiliser un table à agitation pour améliorer l'efficacité de digestion.
5.Les cellules dispersées peuvent être recueillies avec un tamis pour être utilisées, et les tissus qui ne sont pas complètement dissociés peuvent être incubés davantage avec une nouvelle solution de travail de Collagenase I à 37°C.
6.Les cellules recueillies ont été lavées avec HBSS sans collagénase.
7.Le substrat cellulaire est utilisé pour resuspendre les cellules ci-dessus, et les cellules ont été inoculées dasn une boîte de culture cellulaire avec un substrat approprié.
Ce protocole fournit seulement un guide et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.
Protocole pour l'obtention d'ostéoblastes de rat à l'aide de collagenase Ⅰ [1]:
1.Préparer les matériaux : les rats SD néonataux de 1 à 3 jours ont été immergés dans l'éthanol à 75% pendant 3 à 5 minutes, et l'éthanol a été lavé à répétition avec saline normale stérile et eau distillée. L'articulation temporomandibulaire a été séparée sur une table opératoire stérile, et le muscle, le périoste et le tissu conjonctif fibreux ont été enlevés, et la couche cartilagineuse a été enlevée pour obtenir l'os sous-chondral. Après trois nettoyages avec FBS, l'os sous-chondral a été coupé en fragements de 1 mm× 1 mm× 1 mm, lavé à nouveau avec FBS jusqu'à ce que l'os soit blanc, et une quantité appropriée de double anticorps a été ajoutée pendant 10 minutes. Eliminer le liquide et placer la pièce d'os sur un papier filtre stérilisé pour absorber l'humidité de surface avant utilisation.
2.Digestion de la collagénase de type I : Prendre les morceaux d'os et ajouter une quantité appropriée d'enzyme pancréatique, remuer et digérer à 37°C pendant 15 minutes, centrifuger à 1000 tours/minute pendant 5 minutes, rincer avec FBS, centrifuger à nouveau, jeter le liquide digestif et ajouter 5mL collagénase de type 1 à 0,1%, digérer pendant 90 minutes, remuer une fois toutes les 15 minutes pendant cette période. Après l'ajout et la centrifugation du milieu complet, ajouter une quantité adéquate de milieu complet contenant 15%, et libérer plus d'ostéoblastes en éclatant les blocs d'os et les amas cellulaires digérés. Après que la précipitation cellulaire a été dispersée, transférer les cellules dans une bouteille de culture de 25mL. Changer le liquide le lendemain, puis, changer le liquide une fois tous les 3 jours.
Ce protocole fournit seulement un guide et doit être modifié selon vos besoins spécifiques.
References:
[1]. Ni Tao, Zhang Wenli, et,al. Comparative study on the effect of modified adhesion tissue block method and modified collagenase elimination method on osteoblast proliferation [J].Journal of Kunming Medical University,2014,35(06):23-28.
| Cas No. | 9001-12-1 | SDF | |
| Synonymes | Collagenase; collagen hydrolase | ||
| Formula | M.Wt | ||
| Solubility | >5mg/mL in water | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Biological Activity: >125CDU/mg Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 25 reference(s) in Google Scholar.)