Collagenase I (Synonyms: Collagenase; collagen hydrolase) |
Katalog-Nr.GC19589
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Collagenase Ⅰ gibt derzeit etwa 4 Typen: Typ-I-Kollagenase, Typ-II-Kollagenase, Typ-III-Kollagenase und Typ-IV-Kollagenase, die spezifische Anwendungen haben: Typ-I-Kollagenase: Enthält eine relativ einheitliche Vielfalt an Enzymaktivitäten (einschließlich Kollagenase, Caseinase, Clostripain und Trypsin-Aktivität).
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Cas No.: 9001-12-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Collagenase Ⅰ gibt derzeit etwa 4 Typen: Typ-I-Kollagenase, Typ-II-Kollagenase, Typ-III-Kollagenase und Typ-IV-Kollagenase, die spezifische Anwendungen haben: Type-I-Kollagenase: Enthält eine relativ einheitliche Vielfalt an Enzymaktivitäten (einschließlich Kollagenase, Caseinase, Clostripain und Trypsin-Aktivität). Es wird häufig zur Herstellung von Epithelzellen und Gewebezellen verwendet. Typ-II-Kollagenase: Enthält eine höhere Clostripain-Aktivität und wird typischerweise zur Herstellung von Zellen aus Geweben wie Herz, Knochen, Muskeln, Thymus und Knorpel verwendet. Typ-III-Kollagenase: Enthält eine geringere Proteseaktivität und wird häufig zur Präparation von Milchdrüsenzellen verwendet. Typ-IV-Kollagenase: Enthält eine geringe Trypsinaktivität und wird üblicherweise zur Vorbereitung von Pankreasinselzellen oder für Zellvorbereitungsexperimente eingesetzt, bei denen die Rezeptorintegrität aufrechterhalten werden muss.
Collagenase Ⅰ wird als Proteinase klassifiziert, die von Bacillus histolyticus abgeleitet ist und die Fähigkeit besitzt, die Bindungen zwischen neutralen Aminosäure- und Glycinresten in Pro-X-Gly-Pro-Sequenzen zu spalten, die prominent in Kollagenproteinen vorkommen.
Collagenase Ⅰ ist relativ mild, mit einer anfänglichen Balance aus Kollagenase, Caseinase, Clostridiumprotease und Trypsin, und ist bei physiologischer Temperatur und pH-Wert gut dissoziiert. Der optimale pH-Wert von Kollagenase I liegt bei 7 ~ 8.
Es besitzt die einzigartige Fähigkeit, natürliches und denatuuriertes Kollagen zu verdauen. Einzigartig unter den Proteasen besitzt Collagenase Ⅰdie Fähigkeit, die dreifach-helikalen natürlichen Kollagenfasern abzubauen, die in Bindegeweben wie Haut, Sehnen, Blutgefäßen und Knochen reichlich vorhanden sind. Der proteolytische Abbau, der durch Kollagenase gefördert wird, wird in der enzymatischen Verdauung menschlicher Tumoren, Nieren, erwachsener und fetaler Gehierne sowie verschiedener zusätzlicher Gewebe eingesetzt, einschließlich solcher mit epithelialen Bestandteilen. Es wirkt ausschließlich auf Prokollagen, bricht es ab und wird dann von anderen Proteasen hydrolysiert, ohne Fibrin und Globlin zu hydrolysieren. Reinigungsmittel, Hexachlorocyclohexan und Schwermetallionen können die Enzymaktivität verringern[1-5]. Collagenase Ⅰ(intravenöse Injektion) könnte vorübergehend den interstitiellen Flüssigkeitsdruck (IFP) durch die Verdauung von Kollagen in Tumoren senken und die Tumorakkumulation sowie die Genexpression des Lipoplex erhöhen[6].
Aktvitätsdefinition: Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 µmole Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei pH 7,5 bei 25°C in Anwesenheit von Calciumionen. Eine neutrale Proteseeinheit hydrolysiert Kasein, um eine Farbe zu erzeugen, die 1,0 µmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 bei 37℃ entsricht. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 µmol BAEE pro Minute bei einem pH-Wert von 7,6 bei 25 ℃ in Gegenwart von DTT.
References:
[1]. Pilcher BK, Sudbeck BD, et,al. Collagenase-1 and collagen in epidermal repair. Arch Dermatol Res. 1998 Jul;290 Suppl:S37-46. doi: 10.1007/pl00007452. PMID: 9710382.
[2]. Ohbayashi N, Yamagata N, et,al.Enhancement of the structural stability of full-length clostridial collagenase by calcium ions. Appl Environ Microbiol. 2012 Aug;78(16):5839-44. doi: 10.1128/AEM.00808-12. Epub 2012 Jun 8. PMID: 22685155; PMCID: PMC3406112.
[3]. Brandhorst H, Brandhorst D, et,al. Successful human islet isolation utilizing recombinant collagenase. Diabetes. 2003 May;52(5):1143-6. doi: 10.2337/diabetes.52.5.1143. PMID: 12716744.
[4]. Hamzeh Alipour, et al. Therapeutic applications of collagenase (metalloproteases): A review. Asian Pac J Trop Biomed, 2016, 6(11): 975-981.
[5]. O'Flanagan CH, Campbell KR, et,al. Dissociation of solid tumor tissues with cold active protease for single-cell RNA-seq minimizes conserved collagenase-associated stress responses. Genome Biol. 2019 Oct 17;20(1):210. doi: 10.1186/s13059-019-1830-0. PMID: 31623682; PMCID: PMC6796327.
[6]. Kato M, Hattori Y, Kubo M, Maitani Y. Collagenase-1 injection improved tumor distribution and gene expression of cationic lipoplex. Int J Pharm. 2012 Feb 28;423(2):428-34. doi: 10.1016/j.ijpharm.2011.12.015. Epub 2011 Dec 17. PMID: 22197775.
Protokoll zur Gewebeisolation durch Collagenase I:
Die Konzentration der Collagenase-I-Speicherlösung beträgt in der Regel 1 g/mL (1000x). Kleine Dosis, eingefreoten bei -20℃ fernab von Licht. Vor der Anwendung auf Eis auftauen, um wiederholtes Auftauen zu vermeiden. Häufig verwendete Konzentrationen für Gewebe- und Zelldispersion sind 0,5-2,5 mg/mL und 1-2 mg/mL für die Knorpelverdauung.
1.Verwenden Sie einsteriles Skalpell oder eine Schere, um das Gewebe in 3~4 mm große Gewebeblöcke zu schneiden
2.Gewebeblöcke wurden mehrfach mit HBSS gewaschen, das Ca2+, Mg2+ enthielt.
3.Eine ausreichende Menge HBSS mit Ca2+, Mg2+ wurde hinzugefügt, um die Gewebemasse einzutauchen, und Collagenase I wurde hinzugefüt.
4.Inkubieren Sie bei 37℃ für 4-18 Stunden zur Verdauung und verwenden einen Schütteltisch, um die Verdauungseffizienz zu verbessern.
5.Die dispergierten Zellen können mit einem Gitterschirm zur Verwendung gesammelt werden, und die Gewebe, die nicht vollständig dissoziiert sind, können mit einer frischen Collagenase-I-Arbeitslösung bei 37 ℃ weiter inkubiert werden.
6.Die gesammelten Zellen wurden mit Kollagennasefreiem HBSS gewaschen.
7.Das Zellkulturmedium wird verwendet, um die oben genannten Zellen wieder aufzuhängen, und die Zellen wurden auf einer Zellkulturschale mit einem geeigneten Zellmedium impft.
Dieses Protokoll bietet lediglich eine Richtlinie und sollte je nach Ihren spezifischen Bedürfnissen angepasst werden.
Protokoll zur Gewinnung von Mausosteoblasten mittels Kollagenase Collagenase I [1]:
1.Aufnahmematerialen: Neugeborene SD-Ratten wurden 1 bis 3 Tage lang in 75% Ethanol für 3 bis 5 Minuten eingetaucht, und das Ethanol wurde wiederholt mit sterilem Kochsalzlösngswasser und destilliertem Wasser gewaschen. Das Kiefergelenk wurde auf einnem sterilen Operationstisch getrennt, und Muskel, Periost und faseriges Bindegewebe wurden entfernt; die Knorpelschicht wurde entfernt, um subchondrales Knochen zu erhalten. Nach dreifacher Reinigung mit PBS wurde der subchondrale Konechen in Fragmente von 1 mm× 1 mm× 1 mm geschnitten, erneut mit PBS gewaschen, bis der Knochen weiß war, und eine angemessene Menge Doppelantikörper wurde für 10 Minuten hinzugefüt. Entsorgen Sie die Flüssigkeit und legen Sie das Knochenstück auf ein sterillisiertes Filterpapier, um die Oberflächenfeuchtigkeit vor der Verwendung aufzunehmen.
2.Type-I-Kollagenaseverdauung: Nimm Knochenstücke und gib eine passende Menge Pankreasenzym hinzu, rühre um und verdaue bei 37℃ 15 Minuten, zentrifugiere bei 1000 U/min 5 Minuten, spüle mit PBS, zentrifugiere erneut, entsorge Verdauungsflüssigkeit und gib 0.1% Type-I-Kollagenase 5 ml zu, verdaut 90 Minuten, schüttle während dieser Zeit einmal alle 15 Minuten. Nachdem das vollständige Medium hinzugefügt und zentrifugiert worden war, wurde die richtige Menge des 15% vollständigen Mediums hinzugefügt, und weitere Osteoblasten wurden durch das Aufblasen von Knochenblöcken und verdauten Zellklumpen freisetzt. Nachdem die Zellausfällung verteilt war, wurden die Zellen in eine 25-ml-Kulturflasche überführt. Wechsele die Flüssigkeit am nächsten Tag und dann alle drei Tage.
Dieses Protokoll bietet lediglich eine Eichtlinie und sollte je nach Ihren spezifischen Bedürfnissen angepasst werden.
References:
[1]. Ni Tao, Zhang Wenli, et,al. Comparative study on the effect of modified adhesion tissue block method and modified collagenase elimination method on osteoblast proliferation [J].Journal of Kunming Medical University,2014,35(06):23-28.
| Cas No. | 9001-12-1 | SDF | |
| Überlieferungen | Collagenase; collagen hydrolase | ||
| Formula | M.Wt | ||
| Löslichkeit | >5mg/mL in water | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Biological Activity: >125CDU/mg Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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