ML-323 |
Catalog No.GC17635
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ML-323 es un inhibidor selectivo altamente reversible y altamente efectivo de USP1-UAF1 con un valor de IC50 de 76nM.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 1572414-83-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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ML-323 es un inhibidor selectivo altamente reversible y altamente efectivo de USP1-UAF1 con un valor de IC50 de 76nM. El valor de Ki de ML-323 para enzimas libres es de 68nM. USP1-UAF1 está estrechamente relacionado con la respuesta al dño del DNA y se puede utilizar para el estudio de la resistencia a los medicamentos antitumorales[1]. ML-323 tiene actividad anticancerígena contra varios cánceres [2-3].
In vitro, en el experimento Ub-Rho, ML-323 (0.08-114μM; 1-2h) exhibió una inhibición una inhibición dependiente de la dosis de USP1-UAF1 con un valor de IC50 de 76nM [1]. ML-323 (0-200μM; 48h) inhibió el crecimiento de las células HCCLM3 y SMMC-7721 HCC y la formación de colonias de una manera dependiente de la dosis[4]. ML-323 (0-400nM; 0, 4, 8 y 16h) podría regular a la baja la expresión de USP1 en las células del cáncer colorrectal de una manera dependiente de la dosis y del tiempo[5].
In vivo, el tratamiento por inyección de ML-323 (10mg/kg; 7 díays) aumentó significativamente el peso corporal de ratones con modelos de colitis y disminuyó la actividad de MPO en los tejidos colónicos y áreas de úlceras, y tuvo un efecto inhibidor significativo en los niveles de marcadores inflamatorios (TNF-α, IL-6, IL-17 e IL-1β) en los tejidos colónicos de ratones de colitis[6]. ML-323 (25 y 50mg/kg/día; oral; dos veces por semana durante 8 semanas) redujo significativamente el peso corporal de los ratones alimentados con una dieta alta en grasas (HFD), mejoró la sensibilidad a la insulian y la glucosa, y disminuyó significativamente el contenido de grasa y el tamaño de los adipocitos en el tejido adiposo blanco, redujo la acumulación de lípidos, los triglicéridos, los ácidos grasos libres y la infiltración de macrófagos en el hígado de los ratones[7].
References:
[1] Liang Q, Dexheimer T S, Zhang P, et al. A selective USP1–UAF1 inhibitor links deubiquitination to DNA damage responses[J]. Nature chemical biology, 2014, 10(4): 298-304.
[2] Sun Y, Sha B, Huang W, et al. ML323, a USP1 inhibitor triggers cell cycle arrest, apoptosis and autophagy in esophageal squamous cell carcinoma cells[J]. Apoptosis, 2022, 27(7): 545-560.
[3] Song B, Jiang Y, Jiang Y, et al. ML323 suppresses the progression of ovarian cancer via regulating USP1-mediated cell cycle[J]. Frontiers in Genetics, 2022, 13: 917481.
[4] Wang L, Hu T, Shen Z, et al. Inhibition of USP1 activates ER stress through Ubi-protein aggregation to induce autophagy and apoptosis in HCC[J]. Cell Death & Disease, 2022, 13(11): 951.
[5] Xu X, Mei X, Han K, et al. The deubiquitinating enzyme USP1 is auto-ubiquitinated and destabilized by ML323 in colorectal cancer cells[J]. Eurasian J Med Oncol, 2023, 7: 174-179.
[6] Lai Y, Liu J, Hu X, et al. N6-methyladenosine (m6A)-forming enzyme METTL3 controls UAF1 stability to promote inflammation in a model of colitis by stimulating NLRP3[J]. Scientific Reports, 2025, 15(1): 5876.
[7] Kim M S, Baek J H, Lee J A, et al. Deubiquitinase USP1 enhances CCAAT/enhancer-binding protein beta (C/EBPβ) stability and accelerates adipogenesis and lipid accumulation[J]. Cell Death & Disease, 2023, 14(11): 776.
| Experimento con quinasas [1]: | |
Método de preparación | Para determinar la IC50 de ML323 en la inhibición de USP1-UAF1, se añadió el inhibidor a siete concentraciones diferentes al ensayo que contenía 150nM USP1-UAF1 y 3μM de diubiquitina ligada a K63 o 300nM USP1-UAF1 y 3μM Ub-PCNA en un tampón que contiene 50mM HEPES (pH 7,8), 0,1mg ml-1 BSA, 0,5mM EDTA y 1mM o 5mM DTT durante 1-2 h a 37°C. La reacción fue atenuada por la adición del tampón de muestra de Laemmli. En la prueba de selectividad ML-323 in vitro, se incubaron individualmente seis concentraciones diferentes (0,08-114 μM) de diubiquitina ligada a ML-323 y 3μM K63 con 7,5nM USP7, 30nM USP2, 15nM USP5, 255nM USP8, 100nM USP11, 600nM USP21 y 600nM USP46-UAF1.Para determinar la IC50 de ML323 en la inhibición de USP1-UAF1, se añadió el inhibidor a siete concentraciones diferentes al ensayo que contenía 150nM USP1-UAF1 y 3μM de diubiquitina ligada a K63 o 300nM USP1-UAF1 y 3μM Ub-PCNA en un tampón que contiene 50mM HEPES (pH 7,8), 0,1mg ml-1 BSA, 0,5mM EDTA y 1mM o 5mM DTT durante 1-2 h a 37°C. La reacción fue atenuada por la adición del tampón de muestra de Laemmli. En la prueba de selectividad ML-323 in vitro, se incubaron individualmente seis concentraciones diferentes (0,08-114 μM) de diubiquitina ligada a ML-323 y 3μM K63 con 7,5nM USP7, 30nM USP2, 15nM USP5, 255nM USP8, 100nM USP11, 600nM USP21 y 600nM USP46-UAF1. |
Condiciones de reacción | 0,08-114 μM; 1-2h |
Áreas de aplicación | En el ensayo Ub-Rho, ML-323 mostró una inhibición dependiente de la dosis de USP1-UAF1, con su valor de IC50 siendo de 76nM. ML323 no mostró un efecto inhibidor significativo en otras proteasas y quinasas. |
| Experimentos celulares [2]: | |
Líneas celulares | Líneas celulares HCC |
Método de preparación | Las líneas celulares de CHCHCLM3, HepG2, Huh7 y SMMC-7721 se sembraron uniformemente en una placa de 96 pozos (3 × 103 células/pocillo) y se trataron con ML-323 o DMSO (0,1%) durante 48 horas. La viabilidad celular se determinó utilizando un kit de recuento de células (CCK)-8 de acuerdo con el protocolo del fabricante. Para el ensayo de formación de colonias, se sembraron 500 células en una placa de 6 pozos por triplicado, tratadas con DMSO o ML-323 y se incubaron durante 10d. Las colonias fueron tratadas con un 4% de paraformaldehído y cristal violeta, luego se contaron. |
Condiciones de reacción | 0-200 μM; 48h |
Áreas de aplicación | ML-323 inhibió el crecimiento de las células HCCHCLM3 y SMMC-7721 de una manera dependiente de la dosis, y también inhibió la formación de colonias. |
| Experimentos con animales [3]: | |
Modelos animales | Ratones C57BL/6 (modelos de colitis) |
Método de preparación | Los ratones machos C57BL/6 (4-5 semanas, 17-19 g) fueron comprados en el Centro Experimental Animal de la Universidad Médica de Guangdong. La colitis se indujo mediante la administración de un 2,0 % de sulfato de dextrano sódico (DSS) en el agua potable durante 7 días. A los ratones se les proporcionó una dieta estándar y agua ad libitum. Se inyectó el inhibidor de UAF1 (10 mg/kg/día durante 7 días de ML-323). La anestesia se indujo con 50 mg/kg de pentobarbital sódico, y los ratones fueron sacrificados por dislocación cervical. Se extrajeron tejidos del colon, macrófagos RAW264.7 y muestras de suero. |
Forma de dosificación | 10 mg/kg/día durante 7 días; inyectar |
Áreas de aplicación | El tratamiento con ML-323 aumentó significativamente el peso corporal de los ratones y redujo la actividad de MPO en los tejidos colónicos y las áreas de úlceras. También tuvo un efecto inhibidor significativo en los niveles de marcadores inflamatorios (TNF-α, IL-6, IL-17 e IL-1β) en los tejidos colónicos de ratones de colitis. |
References: | |
| Cas No. | 1572414-83-5 | SDF | |
| Chemical Name | (E)-1-(4-(1H-1,2,3-triazol-1-yl)phenyl)-N-(2-(2-isopropylphenyl)-5-methylpyrimidin-4(3H)-ylidene)methanamine | ||
| Canonical SMILES | CC(C1=CC=CC=C1C2=NC=C(/C(N2)=N\CC3=CC=C(N4C=CN=N4)C=C3)C)C | ||
| Formula | C23H24N6 | M.Wt | 384.48 |
| Solubility | ≥ 15.05mg/mL in DMSO | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.6009 mL | 13.0046 mL | 26.0092 mL |
| 5 mM | 520.2 μL | 2.6009 mL | 5.2018 mL |
| 10 mM | 260.1 μL | 1.3005 mL | 2.6009 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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