Nitrocefin (Synonyms: Nitrocephin) |
Catalog No.GC14823
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Nitrocefin es un derivado de la cefalosporina con propiedades indicativas del color
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 41906-86-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Nitrocefin es un derivado de la cefalosporina con propiedades indicativas del color [1]. Cuando β-lactamase hydrolyzes el anillo β-lactam de Nitrocefin, el compuesto cambia de color de amarillo a rojo, lo que permite la detección visual [2]. Nitrocefin se utiliza principalmente para la detección rápida de bacterias para la actividad de β-lactamase [3].
References:
[1]. Lee M, Hesek D, Mobashery S. A practical synthesis of nitrocefin[J]. The Journal of organic chemistry, 2005, 70(1): 367-369.
[2]. Worthington R J, Melander C. Overcoming resistance to β-lactam antibiotics[J]. The Journal of organic chemistry, 2013, 78(9): 4207-4213.
[3]. Chow C, Xu H, Blanchard J S. Kinetic characterization of hydrolysis of nitrocefin, cefoxitin, and meropenem by β-lactamase from Mycobacterium tuberculosis[J]. Biochemistry, 2013, 52(23): 4097-4104.
Este protocolo solo proporciona orientación experimental. La aplicación real debe optimizarse y ajustarse de acuerdo con sus objetivos de investigación, tipo de muestra y plataforma de detección [1-2].
1. Preparación de reactivos y materiales
Nitrocefin, DMSO, PBS, colonias bacterianas, suspensión bacteriana o muestras de células lisadas, tampón de hidrólisis.
2. Preparación de la solución de Nitrocefin
(1) Solución de almacenamiento (1-10 mg/mL): Disuelva 5-10 mg de Nitrocefin en DMSO, mezcle bien, almacene en la oscuridad y almacene a -20℃ durante varios meses.
(2) Solución de trabajo (0,5-1,0 mg/mL): Diluya la solución de stock en PBS o Assay Buffer a 0,5-1,0 mg/mL. Si la solución se vuelve roja (no amarilla) después de la preparación, significa que la concentración es demasiado alta y debe diluirse más a una solución amarilla. La solución de trabajo debe mantenerse alejada de la luz, almacenarse a -20℃ y utilizarse en un plazo de 14 días o 2 meses.
3. Método de detección rápida para la actividad de la β-lactamasa
(1) Prueba de diapositivas: Agregue una gota de solución de trabajo a un portaobjetos limpio, inocule una sola colonia y observe la apariencia del rojo (dentro de 20-30 minutos).
(2) Método de contacto directo: Deje caer la solución de trabajo sobre la colonia y observe el cambio de color a rojo en 20-30 minutos.
(3) Método de solución bacteriana: Añadir 3-5 gotas de solución de trabajo a 1 ml de solución bacteriana. Si el color cambia a rojo en 20-30 minutos, indica un resultado positivo.
(4) Método de lisis celular: lisis ultrasónica de 1 ml de solución bacteriana y añadir 3-5 gotas de solución de trabajo. Si el color cambia a rojo en 40 minutos, indica la actividad de la β-lactamasa.
4. Detección cuantitativa fotométrica
(1) Solución estándar y sistema de reacción: Prepare la solución estándar y el gradiente estándar usando Nitrocefin y Buffer de hidrólisis + DMSO.
(2) Procesamiento de muestras: Después de la centrifugación, la resuspensión y la lisis ultrasónica de la cepa sólida, se recogió el sobrenadante para el ensayo. Mezcla de reacción: muestra + mezcla de reacción (por ejemplo, tampón de ensayo + Nitrocefin) se añadió a cada pozo.
(3) Lectura y cálculo: La lectura cinética se realizó a 490 nm. Se recomienda leer cada minuto durante 30-60 minutos. La actividad de la β-lactamasa se calculó en función de la curva estándar y los cambios de tiempo.
(4) La unidad se define como la cantidad de enzima que hidroliza 1 µmol de Nitrocefin por minuto.
Precauciones de operación
(1) Evite la luz durante la operación para evitar la degradación del medicamento.
(2) No utilice la solución de trabajo antes de que se vuelva roja para mantener la precisión de la fórmula amarilla.
(3) Las condiciones experimentales deben optimizarse por la concentración y el tiempo del gradiente para cada tipo de muestra.
References:
[1]. Shannon K, Phillips I. ?-Lactamase detection by three simple methods: Intralactam, nitrocefin and acidimetric[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1980, 6(5): 617-621.
[2]. Allen C, Turner C, Kalsi S, et al. Development of a rapid phenotypic test on a microfluidic device for carbapenemase detection using the chromogenic compound nitrocefin[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2020, 96(4): 114926.
| Cas No. | 41906-86-9 | SDF | |
| Sinónimos | Nitrocephin | ||
| Chemical Name | (6R,7R)-3-((E)-2,4-dinitrostyryl)-8-oxo-7-(2-(thiophen-2-yl)acetamido)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid | ||
| Canonical SMILES | [H][C@]1([C@@H]2NC(CC3=CC=CS3)=O)SCC(/C=C/C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4[N+]([O-])=O)=C(C(O)=O)N1C2=O | ||
| Formula | C21H16N4O8S2 | M.Wt | 516.5 |
| Solubility | 20mg/ml in DMSO, 20mg/mL in DMF | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9361 mL | 9.6805 mL | 19.3611 mL |
| 5 mM | 387.2 μL | 1.9361 mL | 3.8722 mL |
| 10 mM | 193.6 μL | 968.1 μL | 1.9361 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >90.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 3 reference(s) in Google Scholar.)