Nitrocefin (Synonyms: Nitrocephin) |
Catalog No.GC14823
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Nitrocefin est un dérivé de céphalosporine possédant des propriétés colorimétriques.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 41906-86-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Nitrocefin est un dérivé de céphalosporine possédant des propriétés colorimétriques [1]. Lorsque la β-lactamase hydrolyse le cycle β-lactame de Nitrocefin, le composé change de couleur, passant du jaune au rouge, permettant une détection visuelle [2]. Nitrocefin est principalement utilisé pour le dépistage rapide de l'activité β-lactamase [3].
References:
[1]. Lee M, Hesek D, Mobashery S. A practical synthesis of nitrocefin[J]. The Journal of organic chemistry, 2005, 70(1): 367-369.
[2]. Worthington R J, Melander C. Overcoming resistance to β-lactam antibiotics[J]. The Journal of organic chemistry, 2013, 78(9): 4207-4213.
[3]. Chow C, Xu H, Blanchard J S. Kinetic characterization of hydrolysis of nitrocefin, cefoxitin, and meropenem by β-lactamase from Mycobacterium tuberculosis[J]. Biochemistry, 2013, 52(23): 4097-4104.
Ce protocle fournit uniquement des indications expérimentales. L'application pratique doit être optimisée et adjustée en fonction de vos objectifs de recherche, du type d'échantillon et de la plateforme de détection utilisée [1-2].
1. Préparation des réactifs et matériels
Nitrocefin, DMSO, PBS, colonies bactériennes, suspension bactérienne ou échantillons de lysat cellulaire, tampon d'hydrolyse.
2. Préparation de la solution de Nitrocefin
(1) Solution mère (1–10mg/mL):Dissoudre 5–10mg de Nitrocefin dans DMSO, mélanger soigneusement, conserver à l'abri de la lumière et stocker à –20℃ pendant plusieurs mois.
(2) Solution de travail (0.5–1.0mg/mL): Diluer la solution mère dans PBS ou un tampon d'essai pour obtenir une concentration de 0.5–1.0mg/mL. Si la solution vire au rouge (et non au jaune) après préparation, la concentration est trop élevée et doit être diluée jusqu'à obtenir une solution jaune. La solution de travail doit être protégée de la lumière, stockée à -20℃ et utilisée dans un délai de 14 jours à 2 mois.
3. Méthodes de détection rapide de l'activité β-lactamase
(1) Test sur lame: Déposer une goutte de solution de travail sur une lame propre, inoculer une colonie unique et observer l'apparition d'une coloration rouge (dans les 20-30 minutes).
(2) Méthode par contact direct: Déposer la solution de travail sur la colonie et observer la changement de couleur vers le rouge dans les 20-30 minutes.
(3) Méthode en suspension bactérienne: Ajouter 3-5 gouttes de solution de travail à 1mL de suspension bactérienne. Si la couleur vire au rouge dans les 20-30 minutes, le résultat est positif.
(4) Méthode par lyse cellulaire: Lyse par ultrasons de 1mL de suspension bactérienne, puis ajouter 3-5 gouttes de solution de travail. Si la couleur vire au rouge dans les 40 minutes,une activité β-lactamase est détectée.
4. Détection quantitative par spectrophotométrie
(1) Solution standard et système réactionnel: Préparer la solution standard et le gradient de concentration en utilisant de Nitrocefin et un tampon d'hydrolyse contenant de DMSO.
(2) Traitement des échantillons: Après centrifugation, remise en suspension et lyse par ultrasons de la souche bactérienne, recueillir le surnagéant pour l'analyse. Mélange réactionnel: Echantillon + Mélange réactionnel (par exemple, tampon d'essai + Nitrocefin) ajoutés dans chaque puits.
(3) Lecture et calcul: Lecture cinétique à 490nm. Il est recommandé de mesurer toutes les minutes pendant 30–60min. L'activité β-lactamase est calculée sur la base de courbe standard et des variations temporelles.
(4) Définition de l'unité: Quantité d'enzyme qui hydrolyse 1µmol de Nitrocefin par minute.
Précautions opératoires
(1) Manipuler à l'abri de la lumière pour éviter la dégradation du produit.
(2) Ne pas utiliser la solution de travail si elle présente une coloration rouge, pour garantir la fiabilité de la forme jaune initiale.
(3) Les conditions expérimentales doivent être optimisées par des essais de concentrations en gradient et de durée pour chaque type d'échantillon.
References:
[1]. Shannon K, Phillips I. ?-Lactamase detection by three simple methods: Intralactam, nitrocefin and acidimetric[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1980, 6(5): 617-621.
[2]. Allen C, Turner C, Kalsi S, et al. Development of a rapid phenotypic test on a microfluidic device for carbapenemase detection using the chromogenic compound nitrocefin[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2020, 96(4): 114926.
| Cas No. | 41906-86-9 | SDF | |
| Synonymes | Nitrocephin | ||
| Chemical Name | (6R,7R)-3-((E)-2,4-dinitrostyryl)-8-oxo-7-(2-(thiophen-2-yl)acetamido)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid | ||
| Canonical SMILES | [H][C@]1([C@@H]2NC(CC3=CC=CS3)=O)SCC(/C=C/C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4[N+]([O-])=O)=C(C(O)=O)N1C2=O | ||
| Formula | C21H16N4O8S2 | M.Wt | 516.5 |
| Solubility | 20mg/ml in DMSO, 20mg/mL in DMF | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9361 mL | 9.6805 mL | 19.3611 mL |
| 5 mM | 387.2 μL | 1.9361 mL | 3.8722 mL |
| 10 mM | 193.6 μL | 968.1 μL | 1.9361 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >90.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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