Nitrocefin (Synonyms: Nitrocephin) |
Catalog No.GC14823
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Nitrocefin은 색상 표시 특성을 가진 세팔로스포린 유도체이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 41906-86-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Nitrocefin은 색상 표시 특성을 가진 세팔로스포린 유도체이다. β-락타마제가 Nitrocefin의 β-락타마환을 수분해할 때 이 화합물은 노란색에서 빨간색으로 색상이 변해서 시각적 검출이 가능한다 [2]. Nitrocefin은 주로 세균의 β-락타마제 활성을 신속하게 선별하기 위해 사용된다 [3].
References:
[1]. Lee M, Hesek D, Mobashery S. A practical synthesis of nitrocefin[J]. The Journal of organic chemistry, 2005, 70(1): 367-369.
[2]. Worthington R J, Melander C. Overcoming resistance to β-lactam antibiotics[J]. The Journal of organic chemistry, 2013, 78(9): 4207-4213.
[3]. Chow C, Xu H, Blanchard J S. Kinetic characterization of hydrolysis of nitrocefin, cefoxitin, and meropenem by β-lactamase from Mycobacterium tuberculosis[J]. Biochemistry, 2013, 52(23): 4097-4104.
이 프로토콜은 단지 실험 지침을 제공하고 실제 적용은 연구 목표, 샘플 유형 및 검출 플랫폼에 따라 최적화 및 조정해야 합니다[1-2].
1. 시약 및 재료 준비
Nitrocefin, DMSO, PBS, 세균 군집, 세균 서스펜션 또는 파괴된 세포 시료, 수해 버퍼.
2.Nitrocefin 용액 준비
(1) 원액 (1–10mg/mL): Nitrocefin 5–10mg을 DMSO에 녹인 후 잘 섞고 어두운 곳에 보관하고 -20℃에서 수개월 동안 보관합니다.
(2) 작업 용액 (0.5–1.0mg/mL): 원액을 PBS나 검사 버퍼로 0.5–1.0mg/mL로 희석합니다. 준비 후 용액이 빨간색(노란색이 아닌)으로 변하면 농도가 너무 높아 노란색 용액으로 더 희석해야 합니다. 작업 용액은 빛을 피해서 보관하고 -20℃에서 보관하며 14일 이내 또는 2개월 이내에 사용해야 합니다.
3. β-락타마제 활성의 빠른 검출 방법
(1) 슬라이드 테스트: 깨끗한 슬라이드에 작업 용액 한 방울을 떨어뜨리고 단일 식민지를 접종해서 20-30분 이내에 빨간색의 발생을 관찰합니다.
(2) 직접 접촉법: 작업 용액을 식민지에 떨어뜨리고 20-30분 이내에 빨간색으로의 색상 변화를 관찰합니다.
(3) 세균 용액 방법: 1㎖의 세균 용액에 작업용액 3-5방울을 추가합니다. 색상이 20-30분 이내에 빨간색으로 변하면 양성 결과를 나타냅니다.
(4) 세포 파괴 방법: 1㎖의 세균 용액을 초음파로 파괴하고 작업 용액 3-5방울을 추가합니다. 색상이 40분 이내에 빨간색으로 변하면 β-락타마제 활성이 있습니다.
4. 광도 측정량적 검출
(1) 표준 용액 및 반응 시스템: Nitrocefin과 수해 버퍼 + DMSO를 사용해서 표준 용액과 표준 경사를 준비합니다.
(2) 시료 처리: 고체 균주를 원심 분리, 소생 및 초음파 파괴한 후 상청액을 검사용으로 수집합니다. 반응 혼합물: 시료 + 반응 혼합물(예: 검사 버퍼 + Nitrocefin)을 각 웰에 추가합니다.
(3) 측정 및 계산: 490nm에서 동적 측정을 수행하였습니다. 30–60분마다 매 분마다 측정하는 것이 좋습니다. β-락타마제 활성은 표준 곡선과 시간 변화를 기준으로 계산되었습니다.
(4) 단위는 분당 1µmol의 Nitrocefin을 수해하는 효소의 양으로 정의됩니다.
작업 주의사항
(1) 작용 중 빛을 피해서 약물 분해를 방지합니다.
(2) 노란색 공식의 정확성을 유지하기 위해 용액이 빨간색으로 변하기 전에 작업 용액을 사용하지 마십시오.
(3) 각 시료 종류에 따른 실험 조건을 농도 경사와 시간으로 최적화해야 합니다.
References:
[1]. Shannon K, Phillips I. ?-Lactamase detection by three simple methods: Intralactam, nitrocefin and acidimetric[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1980, 6(5): 617-621.
[2]. Allen C, Turner C, Kalsi S, et al. Development of a rapid phenotypic test on a microfluidic device for carbapenemase detection using the chromogenic compound nitrocefin[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2020, 96(4): 114926.
| Cas No. | 41906-86-9 | SDF | |
| Synonyms | Nitrocephin | ||
| Chemical Name | (6R,7R)-3-((E)-2,4-dinitrostyryl)-8-oxo-7-(2-(thiophen-2-yl)acetamido)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid | ||
| Canonical SMILES | [H][C@]1([C@@H]2NC(CC3=CC=CS3)=O)SCC(/C=C/C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4[N+]([O-])=O)=C(C(O)=O)N1C2=O | ||
| Formula | C21H16N4O8S2 | M.Wt | 516.5 |
| Solubility | 20mg/ml in DMSO, 20mg/mL in DMF | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9361 mL | 9.6805 mL | 19.3611 mL |
| 5 mM | 387.2 μL | 1.9361 mL | 3.8722 mL |
| 10 mM | 193.6 μL | 968.1 μL | 1.9361 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >90.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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