TSQ

Este protocolo solo proporciona una guía y debe modificarse de acuerdo con sus necesidades específicas.

1. Preparación de la solución de tinción

(1) Preparación de la solución de stock:

Disuelva TSQ en DMSO para preparar una solución de caldo con una concentración de 1-5mmol/L.

Nota: Aliquot solución de stock sin usar y almacenar a -20°C o -80°C, protegido de la luz. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

(2) Preparación de la solución de trabajo:

Diluir la solución original con un tampón apropiado (e.g., medio libre de suero o PBS) para preparar una solución de trabajo con una concentración de 0.1-100μmol/L.

Nota: Adjuste la concentración de la solución de trabajo según sea necesario. Preparar fresco antes de usar.

2. Tinción de células de suspensión

(1) Células de suspensión:

Centrifuga a 4°C, 1000×g durante 3-5 minutos, deseche el sobrenadante y lave dos veces con PBS (5 minutos cada uno).

(2) Células adherentes:

Lave dos veces con PBS, luego digiera las células con tripsina. Después de la digestión, centrifugar a 1000×g durante 3-5 minutos.

(3) Resuspender las células en 1mL de TSQ e incubar a 37°C en la oscuridad durante aproximadamente 30 minutos.

Nota: El tiempo de incubación óptimo varía según el tipo de célula. Optimizar en función de los requisitos experimentales.

(4) Después de la incubación, centrifugar a 1000×g durante 5 minutos, desechar el sobrenadante y lavar 2-3 veces con PBS (5 minutos cada uno).

(5) Resuspendir las células en medio libre de suero precalentado o PBS y observar utilizando microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

3. Tinción de células adherentes

(1) Cultive células adherentes en cubiertas estériles.

(2) Retire la cubierta del medio, aspire el exceso de medio y coloque la cubierta en un ambiente húmedo.

(3) Agregue 100μL de la solución de trabajo de tinte a una esquina de la cubierta e incline suavemente para garantizar una cobertura uniforme de todas las células.

(4) Incubar a 37°C en la oscuridad durante 30 minutos.

Nota: El tiempo de incubación óptimo varía según el tipo de célula. optimizar en función de los requisitos experimentales.

(5) Después de la incubación, aspire la solución de trabajo de tinte y lave la cubierta 2-3 veces con medio de cultivo precalentado.

4. Detección microscopíaction

Las longitudes de onda máximas de excitación/emisión de TSQ son de aproximadamente 360nm/470nm.

Reference:
[1] Meeusen J W, Tomasiewicz H, Nowakowski A, et al. TSQ (6-methoxy-8-p-toluenesulfonamido-quinoline), a common fluorescent sensor for cellular zinc, images zinc proteins[J]. Inorganic chemistry, 2011, 50(16): 7563-7573.