Boc-Phe-Ser-Arg-AMC |
Catalog No.GA21114
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Boc-Phe-Ser-Arg-AMC est un substrat fluorescent qui, une fois clivé par des protéases, libère AMC hautement fluorescent (longueurs d'onde d'excitation/émission : 355 nm/460 nm). Boc-Phe-Ser-Arg-AMC est caractérisé par sa dégradation préférentielle par le facteur de coagulation Xla et est largement utilisé pour détecter l'activité d'enzymes telles que la typsine, la tryptase et la kallicréine.
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Cas No.: 73554-90-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Boc-Phe-Ser-Arg-AMC est un substrat fluorescent qui, une fois clivé par des protéases, libère AMC hautement fluorescent (longueurs d'onde d'excitation/émission : 355 nm/460 nm). Boc-Phe-Ser-Arg-AMC est caractérisé par sa dégradation préférentielle par le facteur de coagulation Xla et est largement utilisé pour détecter l'activité d'enzymes telles que la typsine, la tryptase et la kallicréine[1,2,3]. Boc-Phe-Ser-Arg-AMC est également très sensible aux protéases de la matrice mitochondriale de la levure et à la trypsine des mastocytes de rat. Lorsque la liaison peptidique Arg-AMC est clivée par les protéases, AMC est libéré, et l'augmentation de l'intensité de fluorescence est proportionnelle à l'activité enzymatique[4,5,6].
References:
[1] KALE S S, BERGERON-BRLEK M, WU Y, et al. Thiol-to-amine cyclization reaction enables screening of large libraries of macrocyclic compounds and the generation of sub-kilodalton ligands[J]. Science Advances, 2019, 5(8): eaaw2851.
[2] GONG Z, DAI S, JIANG X, et al. Variants in KLK11, affecting signal peptide cleavage of kallikrein-related peptidase 11, cause an autosomal-dominant cornification disorder[J]. British Journal of Dermatology, 2023, 188(1): 100-111.
[3] KOMATSU N, SAIJOH K, KUK C, et al. Aberrant human tissue kallikrein levels in the stratum corneum and serum of patients with psoriasis: dependence on phenotype, severity and therapy[J]. British Journal of Dermatology, 2007, 156(5): 875-883.
[4] BRAGANZA V J, SIMMONS W H. Tryptase from rat skin: purification and properties[J]. Biochemistry, 1991, 30(20): 4997-5007.
[5] YASUHARA T, OHASHI A. New chelator-sensitive proteases in matrix of yeast mitochondria[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1987, 144(1): 277-283.
[6] ROEDL D, TRAIDL-HOFFMANN C, RING J, et al. Serine protease inhibitor lymphoepithelial Kazal type-related inhibitor tends to be decreased in atopic dermatitis. 2009.
Utilisation de Boc-Phe-Ser-Arg-AMC pour mesurer l'activité trypsine-type dans les échantillons de stratum corneum[1]:
(1)Mélanger 0,5mg d'échantillons lyophilisés de stratum corneum avec 500µL de tampon d'essai (50mM Tris, 1M NaCl, 10mM EDTA, pH 8.5), incuber à 37°C pendant une heure sur un agitateur, puis centrifuger à 13000×g pendant 10min à 4℃.
(2)Récupérer le surnageant pour l'essai d'activité protéase; utiliser Boc-Phe-Ser-Arg-AMC comme substrat pour mesurer l'activité de la protéase trypsine-type.
(3)Mélanger 100µL d'échantillon de surnageant avec 100µl de tampon d'essai contenant 0,75mM de Boc-Phe-Ser-Arg-AMC, incuber à 37°C pendant 5h, et mesurer l'activité toutes les heures.
(4)Détecter AMC libéré à l'aide d'un détecteur de microplaques multifonctionnel aux longueurs d'onde Ex/Em de 355nm/460nm, et étalonner à l'aide d'étalons d'AMC.
Utilisation de Boc-Phe-Ser-Arg-AMC pour mesurer l'activité de la peptidase liée à la kallicréine 6 (KLK6)[2]:
(1)Ajouter 5µL d'inhibiteur (utiliser des dilutions 1:2 ou 1:3 pour obtenir différentes concentrations finales d'essai) ou un témoin DMSO (concentration finale d'essai 2%) dans chaque puits d'une microplaque noire de 384 puits.
(2)Ajouter ensuite 5µL de KLK6 (concentration finale d'essai 5nM) dissoute dans un tampon de réaction (50mM Tris, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 0.05% Tween-20, pH 7.5), et incuber à température ambiante pendant 30 minutes.
(3)Juste avant de commencer la mesure cinétique de l'intensité de fluorescence (Ex, 350 ± 15nm; Em, 440 ± 20nm; toutes les 60 secondes pendant 30 minutes), ajouter 10µL du substrat Boc-Phe-Ser-Arg-AMC (concentration finale d'essai 20µM) dissous dans le tampon de réaction dans chaque puits.
(4)Calculer la pente des signaux mesurés à l'aide de GraphPad Prism, la normaliser par rapport au témoin DMSO (activité à 100%), puis l'utiliser pour générer des courbes dose-réponse.
References:
[1] GONG Z, DAI S, JIANG X, et al. Variants in KLK11, affecting signal peptide cleavage of kallikrein-related peptidase 11, cause an autosomal-dominant cornification disorder[J]. British Journal of Dermatology, 2023, 188(1): 100-111.
[2] DE VITA E, SCHÜLER P, LOVELL S, et al. Depsipeptides featuring a neutral P1 are potent inhibitors of kallikrein-related peptidase 6 with on-target cellular activity[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2018, 61(19): 8859-8874.
| Cas No. | 73554-90-2 | SDF | |
| Formula | C33H43N7O8 | M.Wt | 665.75 |
| Solubility | Soluble in DMSO | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.5021 mL | 7.5103 mL | 15.0207 mL |
| 5 mM | 300.4 μL | 1.5021 mL | 3.0041 mL |
| 10 mM | 150.2 μL | 751 μL | 1.5021 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >90.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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