Boc-Phe-Ser-Arg-AMC |
Catalog No.GA21114
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Boc-Phe-Ser-Arg-AMC는 단백질 분해효소에 의해 절단되면 고형광 강도의 AMC(Ex/Em: 355 nm/460 nm)를 방출하는 형광 기질이다. Boc-Phe-Ser-Arg-AMC는 응고 인자 XIa에 의한 가수분해에 우선적으로 작용하고 트립신, 트립타제, 칼리크레인 등 효소 활성을 검출하기 위해 일반적으로 사용된다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 73554-90-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Boc-Phe-Ser-Arg-AMC는 단백질 분해효소에 의해 절단되면 고형광 강도의 AMC(Ex/Em: 355 nm/460 nm)를 방출하는 형광 기질이다. Boc-Phe-Ser-Arg-AMC는 응고 인자 XIa에 의한 가수분해에 우선적으로 작용하고 트립신, 트립타제, 칼리크레인 등 효소 활성을 검출하기 위해 일반적으로 사용된다. 게다가 Boc-Phe-Ser-Arg-AMC는 효소 미토콘드리아 매트릭스 내 프로테아제와 쥐 비만세포 트립신에 대해서도 높은 민감도를 보인다. Arg-AMC 펩타이드 결합이 프로테아제에 의해 절단되면 AMC가 방출되고 형광 강도의 증가는 효소 활성에 비례한다[4,5,6].
References:
[1] KALE S S, BERGERON-BRLEK M, WU Y, et al. Thiol-to-amine cyclization reaction enables screening of large libraries of macrocyclic compounds and the generation of sub-kilodalton ligands[J]. Science Advances, 2019, 5(8): eaaw2851.
[2] GONG Z, DAI S, JIANG X, et al. Variants in KLK11, affecting signal peptide cleavage of kallikrein-related peptidase 11, cause an autosomal-dominant cornification disorder[J]. British Journal of Dermatology, 2023, 188(1): 100-111.
[3] KOMATSU N, SAIJOH K, KUK C, et al. Aberrant human tissue kallikrein levels in the stratum corneum and serum of patients with psoriasis: dependence on phenotype, severity and therapy[J]. British Journal of Dermatology, 2007, 156(5): 875-883.
[4] BRAGANZA V J, SIMMONS W H. Tryptase from rat skin: purification and properties[J]. Biochemistry, 1991, 30(20): 4997-5007.
[5] YASUHARA T, OHASHI A. New chelator-sensitive proteases in matrix of yeast mitochondria[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1987, 144(1): 277-283.
[6] ROEDL D, TRAIDL-HOFFMANN C, RING J, et al. Serine protease inhibitor lymphoepithelial Kazal type-related inhibitor tends to be decreased in atopic dermatitis. 2009.
Boc-Phe-Ser-Arg-AMC를 이용한 각질층 시료 내 트립신 유사 활성 측정[1]：
(1) 동결건조 각질층 시료(0.5 mg)를 500 μL 반응완충액(50 mM Tris, 1 M NaCl, 10 mM EDTA, pH 8.5)과 혼합한 후 37 ℃ 셰이커에서 1시간 배양하고 4 ℃, 13 000×g로 10분간 원심분리합니다.
(2) 상청을 취하여 Boc-Phe-Ser-Arg-AMC를 기질로 사용해 트립신 유사 프로테아제 활성을 측정합니다.
(3) 상청 100 μL에 0.75 mM Boc-Phe-Ser-Arg-AMC가 포함된 반응완충액 100 μL를 혼합해서 37 ℃에서 5시간 반응시키고 1시간 간격으로 활성을 측정합니다.
(4) 방출된 AMC는 다기능 마이크로플레이트 리더기로 Ex/Em 355 nm/460 nm에서 검출하고 AMC 표준품으로 보정합니다.
Boc-Phe-Ser-Arg-AMC를 이용한 칼리크레인 관련 펩티다아제 6(KLK6) 활성 측정[2]：
(1) 384-웰 블랙 판의 각 웰에 5 μL의 억제제(최종 농도 차이를 위해 1:2 또는 1:3으로 희석) 또는 DMSO 대조 그룹(최종 농도 2%)을 첨가합니다.
(2) 이어서 반응완충액(50 mM Tris, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.05 % Tween-20, pH 7.5)에 녹인 KLK6(최종 농도 5 nM) 5 μL를 추가해서 실온에서 30분간 배양합니다.
(3) 형광 강도 동력학 측정(Ex 350 ± 15 nm, Em 440 ± 20 nm; 60초마다, 총 30분)을 시작하기 직전에 각 웰에 반응완충액에 녹인 기질 Boc-Phe-Ser-Arg-AMC(최종 농도 20 μM) 10 μL를 즉시 첨가합니다.
(4) GraphPad Prism으로 측정 신호의 기울기를 계산하고 DMSO 대조 그룹을 100% 활성으로 정규화한 후 이를 이용해서 농도-반응 곡선을 작성합니다.
References:
[1] GONG Z, DAI S, JIANG X, et al. Variants in KLK11, affecting signal peptide cleavage of kallikrein-related peptidase 11, cause an autosomal-dominant cornification disorder[J]. British Journal of Dermatology, 2023, 188(1): 100-111.
[2] DE VITA E, SCHÜLER P, LOVELL S, et al. Depsipeptides featuring a neutral P1 are potent inhibitors of kallikrein-related peptidase 6 with on-target cellular activity[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2018, 61(19): 8859-8874.
| Cas No. | 73554-90-2 | SDF | |
| Formula | C33H43N7O8 | M.Wt | 665.75 |
| Solubility | Soluble in DMSO | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.5021 mL | 7.5103 mL | 15.0207 mL |
| 5 mM | 300.4 μL | 1.5021 mL | 3.0041 mL |
| 10 mM | 150.2 μL | 751 μL | 1.5021 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >90.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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