H-Gln-βNA . HCl |
Catalog No.GA22342
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H-Gln-βNA . HCl은 글루타미닐 사이클라아제의 특이적 형광 기질로 여기 파장은 320nm이고 방출 파장은 410nm이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 201988-95-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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H-Gln-βNA . HCl은 글루타미닐 사이클라아제의 특이적 형광 기질로 여기 파장은 320nm이고 방출 파장은 410nm이다. H-Gln-βNA . HCl은 크로마핀 세포 분비물에서 글루타미닐 사이클라아제의 활성 의존적 분비를 검출하기 위해 사용할 수 있다[2]. H-Gln-βNA . HCl은 금속 킬레이팅제 및 이미다졸 유도체와 관련된 글루타미닐 사이클라아제 억제제를 평가하기 위해 사용할 수 있다[3].
References:
[1] Koch B, Kolenko P, Buchholz M, et al. Crystal structures of glutaminyl cyclases (QCs) from Drosophila melanogaster reveal active site conservation between insect and mammalian QCs[J]. Biochemistry, 2012, 51(37): 7383-7392.
[2] Cynis H, Funkelstein L, Toneff T, et al. Pyroglutamate-amyloid-β and glutaminyl cyclase are colocalized with amyloid-β in secretory vesicles and undergo activity-dependent, regulated secretion[J]. Neurodegenerative Diseases, 2014, 14(2): 85-97.
[3] Huang K F, Hsu H L, Karim S, et al. Structural and functional analyses of a glutaminyl cyclase from Ixodes scapularis reveal metal-independent catalysis and inhibitor binding[J]. Biological Crystallography, 2014, 70(3): 789-801.
H-Gln-βNA . HCl을 기질로 사용해서 글루타미닐 사이클라아제 활성을 측정하는 방법[1] 본 프로토콜은 참고용 지침이고 특정 요구사항에 따라 수정하시기 바랍니다.
1.용액 제조
(1) 원액 제조: 고품질 무수 DMSO를 사용해서 1mM 농도의 H-Gln-βNA . HCl 원액을 제조합니다. 주의: 사용하지 않은 원액은 소분해서 -20°C에서 빛을 차단하여 보관하고 반복적인 동결 및 해동을 피하도록 합니다.
(2) 작업 용액 제조: 원액을 PBS로 희석해서 100μM 농도의 작업 용액을 제조합니다. 실제 상황에 따라 작업 용액의 농도를 조절하고 반복적인 동결 및 해동을 피하기 위해 사용 직전에 제조합니다. 주의: 작업 용액은 실험 당일 신선하게 제조해야 합니다.
2. 시료 전처리 뇌 또는 말초 조직에서 얻은 검체를 10mM Tris, 100mM NaCl, 5mM EDTA, 0.5% Triton X-100 및 10% 글리세롤로 구성된 pH 7.5의 완충액에 넣고 균질화기를 사용해서 균질화합니다. 균질액을 추가로 초음파 처리한 후 4°C에서 16000×g으로 30분간 원심분리합니다. 글루타미닐 사이클라아제 및 이소-글루타미닐 사이클라아제를 포함한 상층액의 단백질 농도를 5-7mg/ml로 조절합니다.
3.반응 및 검출
반응 시료는 50μM H-Gln-βNA . HCl, 25mM MOPS(pH 7.0), 0.1mM N-ethylmaleinimide 및 효소 용액으로 구성되고 최종 부피는 1ml입니다. 반응 온도는 37°C입니다. 최대 1시간 동안 검체를 채취하고 5분간 가열해서 반응을 중지한 후 16000×g으로 10분간 원심분리합니다. 상층액을 HPLC 분석에 적용합니다. 시료(20μl)를 주입하고 용매 A(0.1% TFA를 포함한 아세토니트릴)의 농도를 용매 B(0.1% TFA를 포함한 H₂O) 중에서 8%에서 20%까지 증가시켜 분리합니다. 글루타미닐 사이클라아제 활성은 측정된 pGlu-βNA의 표준 곡선을 기준으로 정량합니다.
4.주의 사항:
(1) 형광 소멸을 늦추기 위해 가능한 한 빛을 피하도록 합니다.
(2) 안전과 건강을 위해 작업할 때 실험복과 일회용 장갑을 착용해야 합니다.
(3) H-Gln-βNA . HCl은 실험 전 과정에서 빛을 차단해서 보관해야 합니다.
(4) 본 프로토콜 및 모든 시약은 과학 연구용으로만 사용합니다.
References:
[1] Schilling S, Kohlmann S, Bäuscher C, et al. Glutaminyl cyclase knock-out mice exhibit slight hypothyroidism but no hypogonadism: implications for enzyme function and drug development[J]. Journal of Biological Chemistry, 2011, 286(16): 14199-14208.
| Cas No. | 201988-95-6 | SDF | |
| Formula | C15H17N3O2 · HCl | M.Wt | 307.8 |
| Solubility | Soluble in DMSO | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2489 mL | 16.2443 mL | 32.4886 mL |
| 5 mM | 649.8 μL | 3.2489 mL | 6.4977 mL |
| 10 mM | 324.9 μL | 1.6244 mL | 3.2489 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 35 reference(s) in Google Scholar.)